紫外線UVB誘発オルガネラDNA損傷の光修復機能の解明とUVB耐性植物の作出

阐明 UVB 诱导的细胞器 DNA 损伤的光修复功能并创建抗 UVB 植物

• 批准号: 08J07811
• 负责人: 高橋 正明
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J07811/
• 关键词: CPD損傷; UVB耐性; オルガネラ

「研究の目的」これまでに、核以外のオルガネラである、葉緑体・ミトコンドリアにおけるCPDの光修復活性に関する研究は行われてきたが、不明な点が多い。このような中、申請者は、イネの各オルガネラにおいて、UVB照射により生成されたCPDが、青色光により修復されているという事実をこれまでの研究で得てきた。また、それはCPD光回復酵素によるものである可能性を示唆するデータも得る事ができた。そこでまず、光回復酵素が、各オルガネラに局在している事を確かめた上で、どのようにしてCPD光回復酵素が、オルガネラDNA損傷の修復を行っているかを明らかにすることを目的に研究を行った。「研究結果」(1)免疫電顕法とウェスタンブロット法によるCPD光回復酵素の局在解析CPD光回復酵素を過剰に発現しているセンス形質転換体ササニシキの切片サンプルを用いて免疫組織染色を行なった結果、核、葉緑体、ミトコンドリアにおいて、イネCPD光回復酵素のシグナルを確認した。また、核、葉緑体、ミトコンドリアをイネから単離し、それぞれの単離画分溶液を用いてウェスタンブロット解析を行った結果、各オルガネラ画分でのCPD光回復酵素の局在を確認した。(2)GFP融合コンストラクトを用いた一過性発現解析による移行シグナル配列の探索イネCPD光回復酵素の全長や一部をGFPと融合させたコンストラクトを作製し、パーティクルガン法により一過性発現解析を行い、移行シグナル配列の同定を行なった。その結果、イネCPD光回復酵素の核やミトコンドリアへの移行シグナル配列部位を同定した。

到目前为止，已经进行了叶绿体和线粒体中CPD的复兴，这些叶绿体和线粒体是非核核细胞虫的研究，但有许多未知的观点。在这种情况下，申请人获得了这样一个事实，即UVB辐射产生的CPD已通过水稻器官中的蓝光恢复。另外，可以获得可能是由于CPD光恢复酶引起的数据。因此，首先，请确保光学回收酶位于每个有机疾中，然后阐明CPD光学回收酶如何修复有机体DNA损伤。 “研究结果”（1）使用类似老师的转换器Sasanishiki Sasanishiki进行免疫组织染色，该sasanishiki Sasanishiki通过免疫电子方法表达CPD光学回收酶，结果是蛋白质CPD光恢复酶的信号在核成形棒和线粒体中得到了证实。此外，从水稻中分离出核，叶绿素和线粒体，并使用每个分离的单独溶液进行了蛋白质印迹分析。 （2）使用GFP融合构建体的过渡信号序列的极端表达爆炸了一个结合了全长和一部分光恢复酶与GFP的构造，并通过粒子枪法进行了瞬态分析。结果，鉴定了闪烁的CPD光恢复酶的迁移信号排列位点和线粒体。