肝細胞間の接着解徐と肝細胞-基質間の接着によるチロシンキナーゼとPLCγの活性化

由于肝细胞之间的粘附以及肝细胞与基质之间的粘附的释放而激活酪氨酸激酶和PLCγ

• 批准号: 06770398
• 负责人: 高橋 正明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770398/
• 关键词: 肝細胞; 細胞接着; チロシンキナーゼ; PLC_γ

肝細胞間の接着解除と肝細胞-基質間の接着により、イノシトールリン脂質系の代謝が促進される成績を得ている。この機序の解明のため、細胞間接着の解除(カドヘリン関与)と細胞-基質間の接着(インテグリン関与)により、チロシンキナーゼの活性化が起き、それに伴ってPLC_γが活性化され、イノシトールリン脂質代謝が促進されるかどうかについて検討を行なった。ラットを用いてコラゲナーゼ潅流法にて肝細胞を分離、培養を行った。肝細胞と基質との接触は、肝細胞のcollagen-coated dishへの播種により行ない、肝細胞間の接触の解除は、24時間培養後のconfluentになった細胞の外液からのCa^<2+>の除去によった。それらの細胞のcytosol分画を用いて、チロシンキナーゼ活性の測定をProtein Tyrosin Kinase Assay Systemを用い、PLC_γのチロシンリン燐酸化の検出は、抗PLC_γ抗体で免疫沈降された蛋白をWestern blot法を用いて抗フォスフォチロシン抗体をprobeとして行なった。細胞内IP_3濃度の測定は、脂質分画においてIP_3 Assay Systemにて測定した。肝細胞と基質との接触により、チロシンキナーゼ活性は約3倍に増加し、チロシンリン酸化PLC_γの軽度の増加と、細胞内IP_3の有意な増加を認めた。肝細胞間接着の解除では、チロシンキナーゼ活性とチロシンリン酸化PLC_γに有意な増加はみられなかったが、細胞内IP_3濃度は軽度の増加を認めた。以上の成績より、イノシトールリン脂質代謝は、肝細胞と基質との接触によりPLC_γのチロシンリン酸化により促進され、肝細胞間接着の解除では他のPLCの活性化により促進されると推察された。

它已经达到了肝细胞与肝细胞与底物之间的粘附之间的胶水的记录，从而促进了非二氯醇蛋白脂质系统的代谢。为了阐明这种机制，它通过取消细胞粘附（钙粘蛋白的参与）和细胞和底物之间的键（整体介绍）而被酪氨酸激酶激活。通过使用大鼠的胶原酶灌溉将肝细胞分离并培养。肝细胞和底物之间的接触是通过将肝细胞播种到胶原蛋白涂层的盘子中进行的，并且肝细胞之间的接触从每天24小时后融合的细胞的外流体中取消。使用细胞的胞质部分测量酪氨酸激酶的活性。内部IP_3浓度的测量通过脂质中的IP_3分析系统测量。在肝细胞和底物之间接触时，发现酪氨酸激酶活性增加了两倍，氧化酪氨酸氧化物PLC_γ和细胞IP_3的显着增加。在肝细胞互连的释放中，酪氨酸激酶活性和PLC_γγ酪氨酸氧化物没有显着增加，但内部IP_3浓度略有升高。基于上述结果，据推测，Innoctoleulin脂质代谢是通过PLC_γ的酪氨酸氧化而通过肝细胞和底物促进的，而释放的肝细胞粘附是由其他PLC激活促进的。