IL-2受容体γc鎖トランスジェニックマウスの作製とその解析

IL-2受体γc链转基因小鼠的产生和分析

基本信息

批准号：
11148206
负责人：
藤井穂高
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11148206/
关键词：
インターロイキン2 免疫不全症 Jak3蛋白チロシンキナーゼ T細胞 Bc1-2蛋白

项目摘要

本研究では、インターロイキン2受容体(IL-2R),IL-4R,IL-7R,IL-9R,IL-15Rの共通サブユニットで、伴性重症複合免疫不全症の原因遺伝子であるIL-2Rγcの構造機能相関を、培養細胞系とトランスジェニックマウスの系を用いて解析した。1.IL-2Rγcから伝達されるJak3非依存性シグナルの同定IL-2Rγcの細胞内ドメインはJak3蛋白チロシンキナーゼの結合に必須であるC末端領域と膜近傍領域の二つの領域から構成されている。本研究では、膜近傍領域からも、Jak3の活性化を介さないシグナルが伝達されることを明らかにした。2.1L-2Rγcトランスジェニックマウスの作製とその解析リンパ球特異的プロモーターを用いて(1)野生型、(2)細胞内ドメイン全体を欠失させた変異体、そして(3)細胞内ドメインのうち膜近傍領域を保持するがC末端のJak3結合領域を欠失させた変異体、のそれぞれをIL-2Rγc欠損マウスに発現させ、トランスジーンによるIL-2Rγc再構成マウスを作製した。IL-2Rγc欠損マウスで認められる免疫不全状態は、野生型IL-2Rγcの発現によりほぼ完全に回復した。一方、細胞内ドメイン全体を欠失する変異体を発現させても、免疫不全状態の回復は認められなかった。それに対して、膜近傍領域のみを保持する変異体の発現により、T細胞の分化が顕著に回復し、かつT細胞の分化に重要であることが示唆されているBc1-2蛋白の発現も顕著に回復した。このことから、IL-2Rγc細胞内ドメインの膜近傍領域は、T細胞分化においてBc1-2の発現を誘導するシグナルを伝達することにより、T細胞分化を誘導していることが示唆された。しかし、このマウスにおけるT細胞機能の回復は認められず、Jak3結合領域は、T細胞の機能の発現において重要な役割を果たしていることが示された。

在本研究中，我们研究了白介素 2 受体 (IL-2R)、IL-4R、IL-7R、IL-9R 和 IL-15R 的常见亚基 IL-2，以及严重联合免疫缺陷综合征的致病基因。使用培养细胞系和转基因小鼠系统分析了 2Rγc 的结构-功能关系。 1. IL-2Rγc 传递的 Jak3 独立信号的鉴定 IL-2Rγc 的胞内结构域由两个区域组成：C 末端区域和近膜区域，这两个区域对于 Jak3 蛋白酪氨酸激酶的结合至关重要。在这项研究中，我们发现并非由 Jak3 激活介导的信号也从近膜区域传递。 2. 1L-2Rγc 转基因小鼠的创建和分析使用淋巴细胞特异性启动子，我们创建了（1）野生型，（2）删除了整个胞内结构域的突变体，和（3）仅一个胞内结构域的突变体。在 IL-2Rγc 缺陷小鼠中表达保留近膜区域但缺乏 C 端 Jak3 结合区域的小鼠，以产生转基因介导的 IL-2Rγc 重建小鼠。通过表达野生型IL-2Rγc，IL-2Rγc缺陷小鼠中观察到的免疫缺陷状态几乎完全恢复。另一方面，即使表达缺乏整个细胞内结构域的突变体，也没有观察到免疫缺陷的恢复。相反，仅保留近膜区域的突变体的表达显着恢复了T细胞分化，并且还显着表达了Bc1-2蛋白，这被认为对于T细胞分化的恢复很重要。这表明IL-2Rγc胞内结构域的近膜区通过在T细胞分化过程中传递诱导Bc1-2表达的信号来诱导T细胞分化。然而，在这些小鼠中没有观察到T细胞功能的恢复，这表明Jak3结合区在T细胞功能的表达中起着重要作用。