ハイスループットRNAi法によるイネいもち病菌のゲノム機能解析

利用高通量RNAi方法对稻瘟病菌进行基因组功能分析

• 批准号: 08F08426
• 负责人: 中屋敷 均
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08F08426/
• 关键词: RNAサイレンシング; RNAi; イネいもち病菌; ポストゲノム; 病原性遺伝子

当研究室で構築されたハイスループットRNAiベクターpSilent-Duall (pSD1)を用いて、植物細胞壁分解酵素を対象としてサイレンシングによる機能解析を試みた。本研究では,40～50bpの配列を対象遺伝子から抽出し、それをつなげた合成遺伝子をサイレンシングトリガーとするBuilding Blocks法を用いた。対象とした遺伝子群は、細胞壁加水分解酵素であるxylanaseおよびcellobiohydrolase遺伝子ファミリーである。コムギいもち病菌のxylanaseサイレンシング株では病原性が低下していたが、細胞観察の結果、野生株に比べ貫穿糸形成が有意に抑制され、HR誘導の割合が増加していることが明らかとなった。また、垂直侵入後の水平的な感染拡大の速度も低下しており、xylanase遺伝子群が本菌の角皮侵入および病斑拡大の両方に機能していることが示唆された。一方、cellobiohydrolaseサイレンシング株においても病原性の低下がやや見られたが、貫穿糸形成率の低下より、パピラ形成誘導の割合が増加しており、これらの酵素群が本菌の異なった感染場面で機能している可能性が示唆された。

使用在我们的实验室中构建的高通量RNAi载体PSILENT DUAL（PSD1），通过沉默植物细胞壁降解酶来尝试使用功能分析。在这项研究中，我们使用了构建块方法，其中从靶基因中提取了40-50 bp的序列，并将其合成基因用作沉默触发器。感兴趣的基因是细胞壁水解酶木聚糖酶和纤维二氢酶基因家族。小麦爆炸细菌的木聚糖酶沉默菌株中的致病性降低，但细胞观察表明，与野生菌株相比，穿透线的形成受到了显着抑制，并且HR诱导的比例增加了。此外，垂直入侵后的水平感染率也降低了，这表明木聚糖酶基因基因在细菌的角膜侵袭和病变扩散中的作用。另一方面，在纤维异二酶沉默菌株中观察到致病性的略有下降，但是由于穿透性螺纹形成的速度降低，诱导木瓜形成的速率增加了，这表明这些酶可能在细菌的不同感染情况下起作用。

项目成果

Dual promoter vectors for high-throughput gene function analysis by RNA silencing

通过 RNA 沉默进行高通量基因功能分析的双启动子载体

• 发表时间: 2009
• 作者: Nguyen;et al.
• 通讯作者: et al.