DNA二重鎖切断修復と塩基除去修復の相互作用とその修復分子機構の解明

阐明DNA双链断裂修复与碱基切除修复之间的相互作用及其修复的分子机制

基本信息

批准号：
25871149
负责人：
正岡綾
金额：
$ 2.75万
依托单位：
National Institute of Radiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25871149/
关键词：
DNA修復放射線 DNA二重鎖切断塩基損傷

项目摘要

昨年度に引き続き、今年度もDNA二重鎖切断修復の主要な経路であるHRおよびNHEJの細胞内寄与の検討を行った。GFPをレポーター遺伝子として用い、HRおよびNHEJを特異的に検出するプラスミドの、効果的ながん細胞トランスフェクション条件を決定した。同条件を用いたトランスフェクションにより、HRおよびNHEJ検出用プラスミド遺伝子をステイブルに発現するがん細胞株の樹立を試みた。X 線および重粒子線を照射したがん細胞における塩基除去修復経路の関与について、本年度は塩基除去修復に関連するタンパク質の発現量変化に着目して検討を行った。がん細胞をそれぞれの放射線で照射した後、修復時間ごとにタンパク質抽出を行い、ウェスタンブロッティングを行った。その結果、検討したタンパク質間では放射線照射による顕著な差は認められなかった。また、修復時間による発現量変化影響も認められなかった。しかし、DNA二重鎖切断修復タンパク質の阻害剤を用いて放射線照射を行ったところ、放射線照射前後で、わずかではあるが一部の塩基除去修復に関与するタンパク質発現の減少が認められた。そのため、RT-PCR実験をセットアップした。重粒子線照射については、昨年行った炭素線に加え鉄線の影響についても検討を行った。その結果、塩基除去修復欠損の影響は炭素線のほうが鉄線よりも大きいことが明らかとなった。

去年之后，我们研究了HR和NHEJ的细胞内贡献，HR和NHEJ是今年DNA双链断裂修复的主要途径。使用GFP作为记者基因确定了特异性检测HR和NHEJ的质粒的有效癌细胞转染条件。我们试图建立稳定表达质粒基因的癌细胞系，以使用相同条件转染通过转染来检测HR和NHEJ。今年，我们研究了用X射线和重离子束照射的癌细胞中碱基切除修复途径的参与，重点是与碱基切除修复相关的蛋白质表达水平的变化。用每个癌细胞辐照后，在每个修复时间提取蛋白质并进行蛋白质印迹。结果，研究的蛋白质之间没有观察到辐射引起的显着差异。此外，没有观察到由于修复时间引起的表达水平变化的影响。然而，当使用DNA双链破裂修复蛋白的抑制剂进行辐射时，在放射线前后观察到部分碱基切除修复涉及的蛋白质表达略有下降。因此，我们设置了一个RT-PCR实验。关于重离子束照射，除了去年进行的碳电线外，我们还检查了铁线的影响。结果，据表明，碳电线的碱基切除修复缺陷的影响要大于铁线的影响。