植物の新しい分解コンパートメント「リソソーム」の形態学的解析

溶酶体的形态分析，植物中的一种新的降解区室

基本信息

批准号：
10874125
负责人：
森安裕二
金额：
$ 1.34万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10874125/
关键词：
リソソーム液胞自食作用プロテアーゼオートファジー

项目摘要

1.リソソームをパーコール密度勾配遠心法を用いて単離し,リソソームに存在するタンパク質を電気泳動で分離しウェスタンブロット法により解析した。その結果,リソソームは液胞型ATPaseのAサブユニット・Bサブユニット,酸性ホスファターゼが存在することがわかった。2.計画していた蛍光抗体法,免役電子顕微鏡法によるリソソームと液胞の比較は行わなかった。3.タバコ培養細胞を用いた実験系において,ショ糖飢餓処理に伴って活性化されるシステインプロテアーゼのPCRによるクローニングを試みたが,有意義な結果は得られなかった。4.細胞の形態を光学顕微鏡を用いて詳しく観察し,リソソームが形成されるタイミングを調べた。その結果,リソソームを介した自食作用は一過的にしか起こらないこと,そして,この自食作用が終了した後も細胞内タンパク質分解は進行することを明らかにした。さらに,リソソームを介した自食作用が終了した後に起こるタンパク質分解は,液胞が直接関与する自食作用に依ることを示唆する結果を得た。5.リソソームの形成を阻害する薬剤のスクリーニングを行った。その結果,動物細胞の自食作用の阻害剤である3-メチルアデニンが,リソソームの形成を阻害することを明らかにした。

1.利用Percoll密度梯度离心分离溶酶体，通过电泳分离溶酶体中存在的蛋白质并通过Western blotting分析。结果表明，溶酶体含有液泡ATP酶和酸性磷酸酶的A和B亚基。 2.未按计划进行荧光抗体法和免疫电镜对溶酶体和液泡的比较。 3.在使用培养的烟草细胞的实验系统中，我们尝试通过PCR克隆由蔗糖饥饿激活的半胱氨酸蛋白酶，但没有获得有意义的结果。 4.使用光学显微镜详细观察细胞形态，并研究溶酶体形成的时间。结果表明，溶酶体介导的自噬仅短暂发生，即使自噬结束后，细胞内蛋白质降解仍会持续。此外，我们获得的结果表明，溶酶体介导的自噬完成后发生的蛋白质降解取决于直接涉及液泡的自噬。 5.我们筛选了抑制溶酶体形成的药物。结果表明，3-甲基腺嘌呤是动物细胞自噬抑制剂，可抑制溶酶体的形成。