DNAチップによるウシの超早期妊娠診断法の開発

利用DNA芯片开发牛超早孕诊断方法

基本信息

批准号：
19658101
负责人：
橋爪一善
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Iwate University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19658101/
关键词：
遺伝子マイクロアレイ免疫応答細胞・組織発生・分化

项目摘要

2009年度は、妊娠に関連する遺伝子群を特定し、その内数種の遺伝子を用いた妊娠診断法を検証し、その有効性を明らかにした。1.特異発現遺伝子の発現解析前年度までにマイクロアレイにより同定した妊娠の開始に関連して変動する遺伝子群を妊娠ウシ末梢血白血球中に同定した。末梢血白血球のうち、顆粒球細胞で特異的に変動することを見いだした。今回主として検証した遺伝子はウシの着床直前の初期胚が特異的で多量に産生するインターフェロン・タウに関連する遺伝子、ISG15、Mx1、Mx2、OAS-1である。妊娠14日あるいは21日と妊娠直前に採取した白血球とを比較すると、マイクロアレイ解析では、個体により変動があるが、これら遺伝子はいずれも受胎個体で有意に高発現であった。この発現量は、定量的RT-PCRにより確認できた。末梢血白血球、特に顆粒球に発現するこれら遺伝子群を用いて早期に妊娠診断が可能なことが明らかとなった。2.血液細胞の収集法の開発顆粒球白血球に対象とする遺伝子群が高発現することから、これらの細胞群を効率的に収集する手法を検討し、比重遠心法により目的とする細胞を高濃度に集積できることを確認した。その画分の細胞比率をフローサイトメーターおよび形態学的検証から、集積細胞の90%以上の細胞が目的とする細胞であることが確認できた。3.遺伝子診断法の有効性の検証妊娠前後のウシの血液を採取、顆粒球白血球を分離して、その発現量を比較し、授精後14日目で、発情周期および譜受胎ウシの顆粒球細胞での発現に比較して高発現であることを確認した。これらの結果から、末梢血顆粒球中の特異的な遺伝子を検出することから牛の超早期妊娠診断がかの上有るとの結論に至った。この診断法について現在特許申請中である。

在2009财年，鉴定了与妊娠相关的基因组，使用几种基因验证了妊娠诊断方法，并揭示了其有效性。 1。基因表达的表达，基因基因基因基因组在财政年度结束前的财政年度之前通过微射线确定的妊娠开始而波动。在外周造血细胞中，我们发现粒细胞特别波动。这次主要证实的基因是与干扰素镇相关的基因，该基因在牛植入之前是特异性和大量早期产生的，是ISG15，MX1，MX2和OAS-1。将怀孕的14天或21天与妊娠前收集的白细胞进行比较，微分析的分析取决于个体，但这些基因在胎儿中都显着高。通过定量RT-PCR证实了该表达。据表明，使用外周血压细胞，尤其是在粒细胞中，可以尽早诊断妊娠诊断。 2。血细胞收集方法开发方法的开发高度表达了针对颗粒状血细胞细胞的基因组，因此我们将考虑一种有效收集这些细胞的方法，并且由特定的重力离心方法高的细胞很高。确认它可以在浓度中积累。从流量计和框架的形态验证中，细胞为细胞，目的是集成细胞的90％或更多细胞。 3。验证基因诊断方法，验证了填缝的有效性，妊娠之前和之后的颗粒白细胞的分离，比较了表达的量。从这些结果中可以得出结论，牛的早期妊娠诊断是通过在外周血颗粒期间检测特定基因来诊断的。此诊断方法目前正在申请专利。