Development of Expression System for Photoreceptor Using Cell-free Protein Synthesis and Application of Its system for Their Functional Analysis

无细胞蛋白合成光感受器表达系统的开发及其功能分析的应用

• 批准号: 19770136
• 负责人: SHIMONO Kazumi
• 金额: $ 2.55万
• 依托单位: Matsuyama University (2008-2010)The Institute of Physical and Chemical Research (2007)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19770136/
• 关键词: 膜タンパク質; 大量発現; ステロイド系界面活性剤; 脂質二重膜; フォトサイクル; ロドプシン; 光受容膜タンパク質; 無細胞タンパク質合成; リポソーム; キサントロドプシン; 界面活性剤; 光誘起プロトン移動; リボソーム; バクテリオロドプシン; フォールディング; 部位特異的ラベル; 非天然アミノ酸導入

In general, a functional cell-free protein synthesis for membrane proteins at high yield is difficult. In the present study, we developed the novel cell-free protein synthesis technology that was performed the steroid derived detergent removal, the lipid bilayer formation, and the protein synthesis by the dialysis method at the same time. We obtained the functional Bacteriorhodopsin in a large amount (0.5mg/mL reaction solution), and this yield was 5-25 times higher than previously described preparations. In addition, it succeeded a functional overexpression of the rhodopsin from marine algae and eubacteria that could not be obtained in large amount using the living cell expression system.

一般来说，高产量膜蛋白的功能性无细胞蛋白质合成是困难的。在本研究中，我们开发了新型无细胞蛋白质合成技术，该技术同时进行类固醇衍生的去污剂去除、脂质双层形成和通过透析方法的蛋白质合成。我们大量获得了功能性细菌视紫红质（0.5mg/mL反应液），其产量比之前描述的制剂高5-25倍。此外，它成功地对来自海藻和真细菌的视紫红质进行了功能性过度表达，而使用活细胞表达系统无法大量获得这种视紫红质。

项目成果

Na+共役型モノカルボン酸輸送担体(SMCT)に対する柑橘類抽出成分の効果

柑橘提取物成分对 Na+-共轭单羧酸转运载体 (SMCT) 的影响

• 发表时间: 2009
• 作者: Hoshina H.;Nxshino GT.;Tashixo S.;Miyazaki M.;Ohmiya Y.;Igarashi K.;Horinouchi S.;Ybshida;M;下野和実
• 通讯作者: 下野和実

Thermodynamic characterization of interacrion between small multidrug resistance transporter (EmrE) and its substrate at various pHs

不同 pH 值下小型多药耐药转运蛋白 (EmrE) 与其底物之间相互作用的热力学表征

• 发表时间: 2010
• 作者: Shimono;K.;Someya;T.;Shirouzu;M.;Yokoyama;S.;Miyauchi;S.
• 通讯作者: S.

Functional Overexpression of Membrane Proteins Using Cell-free Protein Synthesis System Supplemented with Steroid Detergent and Lipid

使用补充有类固醇去垢剂和脂质的无细胞蛋白质合成系统进行膜蛋白的功能性过表达

• 发表时间: 2008
• 作者: 星野英人;近江谷克裕;Kazumi Shimono
• 通讯作者: Kazumi Shimono

無細胞タンパク質合成系を活用した膜タンパク質合成法の開発

利用无细胞蛋白质合成系统开发膜蛋白质合成方法

• 发表时间: 2010
• 期刊: BIOINDUSTRY 27
• 作者: 下野和実;白水美香子;横山茂之
• 通讯作者: 横山茂之

Photochemistry of a Putative New Class of Sensory Rhodopsin (SRIII) coded by xop2 of Haloarcular marismortu

Haloarural marismortu 的 xop2 编码的假定新一类感觉视紫红质 (SRIII) 的光化学

• 发表时间: 2011
• 期刊: Journal of Photochemistry and Photobiology B 102
• 作者: Nakao;Y.;Kikukawa,T.;Shimono;K.;Tamogami;J.;Kimitsuki;N.;Nara;T.;Unno;M.;Ihara;K.;Kamo;N.
• 通讯作者: N.