Trial to control airway inflammation by inflammation-inhibitory signal proteins, A20 and Pyrin

通过炎症抑制信号蛋白 A20 和 Pyrin 控制气道炎症的试验

基本信息

批准号：
19590908
负责人：
YAMAUCHI Kohei
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Iwate Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

ピリンタンパク質は4つの主要なタンパク質ドメインから構成され、同様にピリンドメインを持つファミリ-タンパク質と相互作用し、炎症性サイトカインであるIL-1βの産生を抑制し、さらにNFκBの活性化を抑制し、炎症を終息させる働きを持つ。このピリン蛋白の中でヘリックス構造をなすピリンドメインは蛋白-蛋白の相互作用に関わる重要な部分である。我々はピリンドメインの相互作用するプラットフォ-ム形成を阻害することによって炎症の抑制を行うため、細胞内導入ペプチドシークエンス(KKKKKKKKK)をアミノ末端に付加し、さらにカルボキシ末端にはHAタグシークエンスを付加したピリン蛋白由来のピリンドメインを大腸菌で作成した。この蛋白をNiカラム、ゲル濾過、陰イオン交換カラム、そしてエンドトキシンを除くためにポリミキシンカラムで精製し、マウス気管支喘息モデルを作成後、経鼻的に導入しその効果を検討した。結果 : 血清、BALF中の炎症性サイトカインを検討し、IL-5がピリンドメイン導入した群で有意に低下し、好酸球の減少も確認された。また組織の検討ではピリンドメインタンパク質は気道上皮細胞、気道上皮下の単核球にもその導入が確認された。これらの結果は経気道的投与により、吸入ステロイド薬に替わり選択的にNFκBを抑制しアレルギー性気道炎症を抑える治療薬の可能性を示した。

Pirin蛋白由四个主要蛋白结构域组成，并与同样具有pilin结构域的其他家族蛋白相互作用，抑制炎症细胞因子IL-1β的产生，并进一步抑制NFκB的激活，具有终止炎症的能力。菌毛蛋白结构域具有螺旋结构，是参与蛋白质-蛋白质相互作用的重要部分。为了通过抑制pyrin结构域相互作用平台的形成来抑制炎症，我们在氨基末端添加了细胞内肽序列(KKKKKKKKK)，在羧基末端添加了HA标签序列。是在大肠杆菌中创建的。使用镍柱、凝胶过滤、阴离子交换柱和多粘菌素柱纯化该蛋白质以去除内毒素。在创建小鼠支气管哮喘模型后，将该蛋白质鼻内引入以检查其效果。结果：血清和BALF中炎症细胞因子的检查显示，pyrin结构域引入组中IL-5显着降低，并且嗜酸性粒细胞也减少。此外，组织研究证实菌毛蛋白结构域蛋白被引入气道上皮细胞和上皮下单核细胞中。这些结果表明，当通过气道给药时，有可能开发出一种选择性抑制 NFκB 并抑制过敏性气道炎症的治疗剂，而不是吸入类固醇。