血管内皮細胞増殖因子(VEGF)による血管透過性亢進作用の機序-血管内皮細胞を用いた研究-

血管内皮生长因子（VEGF）诱导血管通透性增强的机制 -利用血管内皮细胞的研究-

• 批准号: 08670122
• 负责人: 入江 かをる
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670122/
• 关键词: ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC); 血管内皮細胞増殖因子(VEGF); 誘導型一酸化窒素合成酵素(iNOS); 塩基性アミノ酸トランスポーター(CAT); 腫瘍壊死因子(TNF-α); エンドトキシン(LPS); アルギニン; 逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)

〔目的〕申請者らは、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)によるマウス皮膚の血管透過性亢進作用に内因性一酸化窒素(NO)が関与することを報告した(第92回日本薬理学会関東部会発表;1995年)。本研究ではVEGFの作用機序の解明を目的として、誘導型NO合成酵素(iNOS)および塩基性アミノ酸トランスポーター(CAT)のup regulationが含まれる可能性について、血管内皮細胞およびマウス皮膚を用いて検討した。CATはNOSの基質であるアルギニンの細胞内への取り込みに関与し、誘導型のCAT-2は、血管平滑筋細胞をサイトカインにより刺激すると、iNOS等と共に共誘導されることが最近報告されている。〔方法〕ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を用いた。HUVECは常法により培養し、サブコンフルエント時に、VEGF1〜30ng/mlを0.5〜4時間作用させた。比較として腫瘍壊死因子(TNF-α)についても調べた。薬物処理後、総RNAを抽出し、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)にてiNOSおよびCAT-2の遺伝子発現について調べた。マウス皮膚については、VEGF1〜10ng/site皮下注射1〜2時間後の注射部位皮膚の総RNAを抽出後、同様にiNOSのRT-PCRを行った。VEGFの比較としてエンドトキシン(LPS)400μg/site s.c.2時間について調べた。〔結果〕(血管内皮細胞)CAT-2については、TNF-α1〜30ng/mlの1〜24時間処置によりmRNAレベルの有意な増加が認められた。VEGF処置の影響については現在研究中である。(マウス皮膚)マウス皮膚のiNOSmRNAレベルは、LPSにより増加が認められ、VEGFでは増加傾向が認められたが、再現性等について研究中である。

[目的]申请人报道了内源性一氧化氮(NO)参与了血管内皮生长因子(VEGF)诱导的小鼠皮肤血管通透性增加的作用(日本药理学会第92届关东地区会议出版)。 。在这项研究中，为了阐明 VEGF 的作用机制，我们利用血管内皮细胞和小鼠皮肤 I 来研究它是否涉及诱导型一氧化氮合酶 (iNOS) 和碱性氨基酸转运蛋白 (CAT) 的上调。考虑了一下。 CAT参与细胞内NOS底物精氨酸的摄取，最近有报道称，当用细胞因子刺激血管平滑肌细胞时，诱导型CAT-2与iNOS等共同诱导。 [方法]采用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。通过常规方法培养HUVEC，当接近汇合时，应用VEGF1至30ng/ml，培养0.5至4小时。为了进行比较，还研究了肿瘤坏死因子（TNF-α）。药物处理后，提取总RNA，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测iNOS和CAT-2基因表达。对于小鼠皮肤，皮下注射1～10ng/位点的VEGF后1～2小时，从注射部位的皮肤提取总RNA，同样地进行iNOS的RT-PCR。作为 VEGF 的比较，研究了内毒素 (LPS) 400 μg/位点皮下处理 2 小时。 [结果] (血管内皮细胞) 对于CAT-2，用1～30ng/ml的TNF-α处理1～24小时后，观察到mRNA水平显着增加。目前正在研究 VEGF 治疗的效果。 (小鼠皮肤) 观察到小鼠皮肤中的iNOS mRNA水平因LPS而增加，且因VEGF而观察到增加趋势，但目前正在研究再现性等。