FRET analysis of protein structural changes by site-specific incorporation of fluorescent nonnatural amino acids

通过位点特异性掺入荧光非天然氨基酸对蛋白质结构变化进行 FRET 分析

• 批准号: 19370063
• 负责人: HOHSAKA Takahiro
• 金额: $ 11.9万
• 依托单位: Japan Advanced Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19370063/
• 关键词: 蛋白質; 非天然アミノ酸; 生物物理; 無細胞翻訳系; 蛍光共鳴エネルギー移動; 4塩基コドン; バイオテクノロジー; プレテオーム

本研究では、これまで開発してきた4塩基コドンなどを用いたタンパク質の部位特異的二重蛍光標識法をさらに発展させることで、タンパク質の立体構造やその変化をFRETにより解析する手法の確立を行なった。実際に、マルトース結合タンパク質などについて基質結合に伴う立体構造変化のFRETを用いた検出や、二重標識に有用なN末端特異的な非天然アミノ酸誘導体の導入法、高効率アンバーサプレッサーtRNAの開発などを達成した。

在这项研究中，我们建立了一种方法，通过使用4个基本密码子进一步开发蛋白质部分的特定部分来分析三维结构和蛋白质的变化。实际上，麦芽糖结合蛋白等使用与底物键相关的立体结构变化的特点，引入非天然氨基酸衍生物的方法，该方法特定于双重签名的N末端，高效率的amber -supplieder trna，等等。实现。

项目成果

遺伝暗号の拡張によるタンパク質のピンポイント蛍光標識技術の開発

通过扩展遗传密码开发蛋白质精确荧光标记技术

• 发表时间: 2007
• 作者: Abe;Y.;Watanabe;N.;Yoshida;Y.;Ebata;F.;Katayama;T.;and Ueda;T.;Seimiya H;神取 秀樹;芳坂 貴弘
• 通讯作者: 芳坂 貴弘

非天然アミノ酸導入技術を利用した二重蛍光標識タンパク質の合成とFRET分析への応用

非天然氨基酸导入技术合成双荧光标记蛋白及其在FRET分析中的应用

• 发表时间: 2008
• 作者: 江草忠義;飯島一生;芳坂貴弘
• 通讯作者: 芳坂貴弘

蛍光標識アミノ酸のタンパク質C末端への特異的導入

将荧光标记的氨基酸特异性引入蛋白质的C末端

• 发表时间: 2009
• 作者: 徳田安則;白神かおり;芳坂貴弘
• 通讯作者: 芳坂貴弘

蛍光標識アミノ酸の導入によるシアル酸結合レクチンの基質結合の蛍光検出

通过引入荧光标记的氨基酸来荧光检测唾液酸结合凝集素的底物结合

• 发表时间: 2009
• 作者: 伊藤 康高;飯島一生;徳田 安則;矢部 力朗;久野 敦;平林 淳;芳坂貴弘
• 通讯作者: 芳坂貴弘

二種類の非天然アミノ酸の導入によるタンパク質構造変化のFRET分析

由于引入两种非天然氨基酸而引起的蛋白质结构变化的 FRET 分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 飯島一生;芳坂貴弘
• 通讯作者: 芳坂貴弘