脳虚血および再潅流時における細胞内Oxidative Stressの経時的解析

脑缺血再灌注过程中细胞内氧化应激的时程分析

基本信息

批准号：
07770466
负责人：
渡辺茂
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770466/
关键词：
脳虚血再潅流フリーラジカル過酸化水素(H_2O_2)DCFH ROS カタラーゼ

项目摘要

脳虚血再潅流障害のおいてフリーラジカルが深く関与していることは従来から指摘されている。一般にフリーラジカルは半減期が短くて反応性に富むためin vivoでの測定が非常に困難であり、これまでの報告はほとんどがin vitroでのデータであった。今回我々は光学顕微鏡と過酸化水素(H_2O_2)指示性の蛍光色素Dichlorofluorescin (DCFH)を用いて、全脳虚血再潅流時におけるin vivoでの細胞内ROS (Reactive oxygen species)の経時的測定を試み以下の結果を得た。対象とした20匹のSDラットを以下の3群(A群: 虚血再潅流群(10例)、B群:SHAM手術群(5例)、C群:カタラーゼ前投与後虚血再潅流群(5例))に分け検討したところ、10分間の全脳虚血(両側総頚動脈閉塞および全身低血圧)中にはROSは増加することなく3群間に有意差を認めなかった。しかし再潅流後にはROSの急激な増加を認め、既に再潅流2分後よりA群はB群に比し有意な増加(9.82±5.79% vs-2.82±2.51% ; p<0.05)を認め、その有意な増加は再潅流30分後(18.38±9.77% vs-3.58±4.20% ; p<0.05)まで持続した。C群では再潅流後にカタラーゼによりROSの増加が抑えられ、その抑制は再潅流10分後より有意(1.77±4.57% vs12.67±6.15% ; p<0.05)であった。今回の結果からは脳虚血再潅流時のOxidative Stressは虚血中は明らかでなく再潅流時の極めて早期より認められ、少なくとも再潅流30分間は持続すること、及び腹腔内に前投与したカタラーゼによってかなりのOxidative Stressが軽減されることが示された。

研究指出自由基与脑缺血再灌注损伤密切相关。一般来说，自由基的半衰期短且反应性高，因此在体内测量它们非常困难，迄今为止的大多数报告都是基于体外数据。在这里，我们使用光学显微镜和过氧化氢（H_2O_2）指示荧光染料二氯荧光素（DCFH）来测量全脑缺血再灌注期间体内细胞内ROS（活性氧）随时间的变化，并得到了以下结果。。将20只SD大鼠分为三组（A组：缺血再灌注组（10例），B组：SHAM手术组（5例），C组：预给予过氧化氢酶后缺血再灌注组）。 5例）），全脑缺血（双侧颈总动脉闭塞和全身性低血压）10分钟内ROS没有增加，三组之间没有观察到显着差异。然而，再灌注后观察到ROS迅速增加，并且从再灌注后2分钟开始，与B组相比，A组明显增加（9.82±5.79% vs -2.82±2.51%；p<0.05）。再灌注 30 分钟后（18.38±9.77% vs-3.58±4.20%； p<0.05）。在C组中，再灌注后过氧化氢酶抑制了ROS的增加，并且从再灌注后10分钟起这种抑制更加显着（1.77±4.57% vs. 12.67±6.15%；p<0.05）。目前的结果表明，脑缺血再灌注过程中的氧化应激在缺血时并不明显，但在再灌注时很早就被识别出来，并在再灌注后持续至少30分钟，并且过氧化氢酶预先腹腔注射已表明氧化应激可以显着减少。