クローン病類似大腸炎モデルの作製と_<rs>CD4による新たな治療法の開発

克罗恩病样结肠炎模型的创建和使用<rs>CD4的新疗法的开发

基本信息

批准号：
07770384
负责人：
井上詠
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770384/
关键词：
クローン病大腸炎モデル TNB 抗CD4抗体 _<rs>CD4

项目摘要

クローン病は原因不明の炎症性腸疾患で、日本において最近患者数が急増しており,新しい治療法の開発は急務といえる。近年、クローン病におけるCD4陽性細胞の重要性が注目されており、炎症の中心を担うCD4陽性T細胞を念頭においたクローン病の実験モデルの作製は病因を解明する糸口となり,新しい治療法の開発に必須のものである。本年度の研究では、マウスにTNB-BSAをCFAとともに皮下免疫し(計2回)、TNBに対する抗体価の上昇を確認した。TNB10mgの注腸で組織学的な炎症所見が認められ、20mgまで増量すると、ほぼ全てのマウスで下痢を伴う全身的な消耗を来たした。これらのマウスの大腸では、ヒトクローン病に類似する、全層にわたる著明な炎症性細胞浸潤とびらんの形成を非連続的に認め、炎症は2週間以上持続し慢性炎症と考えられた(TNB免疫大腸モデル)。TNB免疫大腸炎群において浸潤リンパ球の表面抗原を酵素抗体法にて検討すると、CD4陽性細胞が優位であった。大腸LPLの細胞表面抗原の変化をflow cytometryにより検討したところ、TNB免疫大腸炎症群でCD45RBの発現に変動が認められ、CD45RB^<low>が増加し、CD45RB^<high>が減少していた。さらに大腸粘膜よりRNAを抽出し、PCR法によりIFN-γ,TNF-αのmRNAの発現が増加していることを確認した。以上よりTNB免疫大腸炎モデルではTh1 typeのCD4細胞が炎症形成に関与していることが示唆された。そこで、注腸後2日目に抗CD4抗体0.2mgを腹腔内投与することによる炎症抑制効果につき検討した。非投与群では6匹4匹が死亡したのに対し、抗CD4抗体投与群では死亡は6匹中1匹のみであり組織学的にも炎症は軽微であった。大腸LPLでは、抗CD4抗体投与群においてCD45RB^<high>が完全に消失しており、腸管粘膜局所におけるIFN-γ,TNF-αのmRNAの発現は減少していた。現在、同モデルにおいてrecombinant soluble CD4投与による炎症抑制効果を検討中であり、将来的にヒトのクローン病に対して臨床応用できるかを追求したい。

克罗恩病是一种原因不明的炎症性肠病，近年来在日本患者数量迅速增加，迫切需要开发新的治疗方法。近年来，CD4阳性细胞在克罗恩病中的重要性引起了人们的关注，建立考虑到在炎症中发挥核心作用的CD4阳性T细胞的克罗恩病实验模型将为研究提供线索。阐明发病机制并开发新的治疗方法至关重要。在今年的研究中，用TNB-BSA和CFA（总共两次）对小鼠进行皮下免疫，证实了针对TNB的抗体滴度增加。用10mg TNB灌肠观察到炎症的组织学结果，当剂量增加到20mg时，几乎所有小鼠出现全身衰竭并伴有腹泻。在这些小鼠的结肠中，不连续地观察到明显的全层炎症细胞浸润和糜烂形成，类似于人类克罗恩病，并且炎症持续超过2周，被认为是慢性炎症（TNB免疫结肠模型）。当使用酶联免疫吸附测定法检查TNB免疫结肠炎组中浸润淋巴细胞的表面抗原时，CD4阳性细胞占主导地位。当我们使用流式细胞术检查结肠LPL中细胞表面抗原的变化时，在TNB免疫的结肠炎症组中观察到CD45RB表达的变化，CD45RB^<low>增加而CD45RB^<high>减少。此外，我们从结肠粘膜提取RNA并通过PCR证实IFN-γ和TNF-α mRNA的表达增加。这些结果表明Th1型CD4细胞参与TNB免疫结肠炎模型中的炎症形成。因此，我们研究了灌肠后第二天腹腔注射0.2 mg抗CD4抗体的抗炎作用。在非施用组中，6只动物中有4只死亡，而在抗CD4抗体施用组中，6只动物中只有1只死亡，并且组织学上炎症轻微。在结肠LPL中，抗CD4抗体施用组中CD45RB^<high>完全消失，并且肠粘膜中IFN-γ和TNF-αmRNA的表达降低。我们目前正在该模型中研究重组可溶性 CD4 给药的抗炎作用，并希望将来在人类克罗恩病方面进行临床应用。