甲殻類の卵黄形成調節機構の解明と人為起源化学物質の影響評価に関する体系的研究

甲壳类卵黄发生调控机制的系统研究及人为化学物质效应评价

基本信息

批准号：
07J13363
负责人：
平野将司
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Prefectural University of Kumamoto
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、海産の小型甲殻類アミ(Mysid crustacea;Americamysis bahia)を対象として、卵巣成熟に密接な関係を示す卵黄タンパク質前駆体(ビテロゲユン,Vtg)の一次構造を明らかにすること、また卵黄形成機構に対する環境化学物質の影響評価を行うことを目的とした。本年度は、卵黄タンパク質のアミノ酸配列自体を解析した。甲殻類のVtgはsubtilisin認識配列が存在し、エンドプロテアーゼによって複数の卵黄タンパク質(ビテリン,Vn)へ切断され、卵母細胞に蓄積される。そこで、個体発生に必要な栄養源として卵黄タンパク質を蓄積している未受精卵を試料とし、卵黄タンパク質のアミノ酸配列決定を試みた。未受精卵抽出試料をSDS-PAGEに供したところ、推定分子量89kDaの位置に主たるバンド、58kDaの位置に比較的明瞭なバンドを形成した。これらのN末端アミノ酸配列を決定したところ、それぞれ10残基のアミノ酸配列が得られ、ホモロジー検索から、LLTPs(脂質伝達タンパク質)スーパーファミリーに属することが明らかとなり、アミVtg一次構造の一部を明らかにした。また、抗アミ卵関連タンパク質抗体を作製し、幼若ホルモン様物質fenoxycarbを曝露したアミの雌特異的タンパク質の発現をウェスタンブロッティングにより調べたところ、これらの個体では推定分子量89kDaのタンパク質発現が減少しており、性成熟の遅延が惹起されることを明らかにした。すなわち、このタンパク質はアミVtgの一部であることから、アミVtg産生は幼若ホルモンによる制御を受けるものと推察された。以上のことから、不明な点が多い甲殻類の内分泌調節機構の重要な基礎的知見が得られ、化学物質の生態影響評価に使用可能である抗体作製に成功した。

在本研究中，我们旨在阐明小型海洋甲壳类糠虾甲壳动物中与卵巢成熟密切相关的卵黄蛋白前体（Vtg）的一级结构；本研究的目的是评估环境化学物质对卵巢成熟的影响；的机制。今年，我们分析了蛋黄蛋白本身的氨基酸序列。甲壳动物 Vtg 具有枯草杆菌蛋白酶识别序列，并被内切蛋白酶切割成多种卵黄蛋白（卵黄蛋白，Vn），并在卵母细胞中积累。因此，我们尝试使用未受精的鸡蛋来确定蛋黄蛋白的氨基酸序列，这些未受精的鸡蛋积累蛋黄蛋白作为个体发育所需的营养来源。当对未受精卵提取物样品进行SDS-PAGE时，在估计分子量为89kDa的位置处形成了主条带，并且在58kDa的位置处形成了相对清晰的条带。当我们确定它们的N端氨基酸序列时，我们获得了每个氨基酸序列的10个残基，同源性搜索显示它们属于LLTPs（脂质转移蛋白）超家族，揭示了Ami的部分一级结构-我做到了。此外，当我们制备抗糠虾卵相关蛋白抗体并通过Western blotting检测暴露于保幼激素样物质苯氧威的糠虾中雌性特异性蛋白质的表达时，我们发现一种蛋白质的表达量估计为这些个体的分子量降低了 89 kDa。研究表明，这种疾病会导致性成熟延迟。即，由于该蛋白质是Ami-Vtg的一部分，因此推测Ami-Vtg的产生受到保幼激素的调节。由此，我们获得了关于甲壳类动物内分泌调节机制的重要基础知识，其中存在许多未知点，并成功生产出可用于评估化学物质生态影响的抗体。

项目成果

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专利数量（0）

ヒメダカ肝臓中エストロゲンおよびプレグナンX受容体シグナル伝達系に及ぼす多環ムスク化合物の影響評価

多环麝香化合物对日本青鳉鱼肝脏雌激素和孕烷X受体信号系统影响的评价

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
山内良子;石橋弘志;金俊佑;平野将司;森大樹;有薗幸司
通讯作者：
有薗幸司

Expression analysis of ecdysone receptor and ultraspiracle mRNA through molting period in mysid crustacean, Americamysis bahia.

糠虾甲壳类美洲虾蜕皮期蜕皮激素受体和超气门 mRNA 的表达分析。

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
Proceeding for International Symposium on Biological Responses to Chemical Pollutants: Toward Establishing an Asian Network of Environmental Toxicology. (in press)
影响因子：
0
作者：
Hirano;M.
通讯作者：
M.

Toxicity to early life stages on medaka (Oryzias latipes) and in vitro estrogen intensity of bisphenol compounds

DOI：
10.11403/jset.11.133
发表时间：
2008-12
期刊：
Japanese journal of environmental toxicology
影响因子：
0
作者：
K. Yokota;C. Kato;M. Hirano;Hiroshi Ishibashib;H. Shiratsuchi;K. Tachibana;K. Arizono
通讯作者：
K. Yokota;C. Kato;M. Hirano;Hiroshi Ishibashib;H. Shiratsuchi;K. Tachibana;K. Arizono

Expression analysis of ecdysone receptor and ultraspiracle mRNA through molting period in mysid crustacean, Americamysis bahia

糠虾蜕皮期蜕皮激素受体和超气孔 mRNA 的表达分析