化学物質の生態リスク評価のための新たな無脊椎モデル生物の確立

化学品生态风险评估新无脊椎动物模式生物的建立

基本信息

批准号：
12J09538
负责人：
平野将司
金额：
$ 2.32万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J09538/
关键词：
環境化学物質甲殻類生態毒性エクジステロイド

项目摘要

海産甲殻類アミの脱皮ホルモン受容体（EcR）に着目し、EcRを介したシグナル伝達機構を指標として、環境化学物質のリスクを評価する生態毒性試験を確立することを目的とする。本年度は、EcR相互作用タンパク質として昨年度同定したclathrin heavy chain（CHC）について、EcRを介した転写における役割について調べた。CHCの細胞内局在を調べたところ、細胞質のみならず核内にも一部存在することを明らかにした。CHC発現プラスミドを作成後、アミEcR・USP発現プラスミドとともに昆虫細胞内で共発現させ、ルシフェラーゼ活性を測定した。その結果、CHC発現区は非発現区よりも有意に高い活性が得られ、且つCHC発現量に依存した活性の上昇が認められたことから、EcRを介した転写活性を促進させる作用をもつものと考えられた。次にCHCがアミEcRのどのアミノ酸と相互作用しているのか調べるため、部位特異的変異導入により、アミEcRのPhe563およびTrp568をアラニンに変異させたプラスミドを構築し、CHCとの共発現におけるレポーター活性を測定した。変異導入プラスミドを用いたレポーターアッセイの結果、W568Aのルシフェラーゼ活性がWTと比較し、有意に減少していたことから、Trp568がCHCとの相互作用に特に強く関与していることを明らかにした。さらに、哺乳細胞を用いたtwo-hybridアッセイを構築し、昆虫コアクチベータTaimanと同様にCHC発現群でもレポーター活性の上昇がみられたことから、転写活性化の促進および安定化に寄与するものと考えられた。このtwo-hybrid系と初年度構築したin silico系を組み合わせ、医薬品および生活関連物質（PPCPs）をスクリーニングしたところ、一部の医薬品、ビスフェノール化合物にアゴニスト・アンタゴニスト作用が認められた。

目的是专注于Sea Crustacean AMI的摩托激素受体（ECR），并建立一种生态毒性测试，以通过ECR作为指数来评估环境化学物质的风险，以评估环境化学物质的风险。今年，我们研究了通过ECR转移涉及卡拉蛋白重链（CHC）的作用，该链链（CHC）去年被确定为ECR相互作用蛋白。研究CHC的细胞内主，它表明它不仅在细胞质中，而且在细胞核中存在部分存在。产生CHC表达质粒后，在AMI ECR和USP表达质粒的昆虫细胞中测量了荧光素酶活性。结果，CHC表达面积比非表达病房具有显着的活性，并且被认为是依赖CHC表达量的活动的增加，这具有通过ECR促进转录活性的作用。接下来，为了找出AMI ECR的氨基酸与氨基酸的相互作用，该质粒已通过引入特定部分 - 特异性突变中的Phe563和trp568突变为AMI ECR的PHE563和TRP568，并在CO中引入了记者。 - 与CHC的表达。通过使用突变体引入质粒的报告基因测定，与WT相比，W568A的荧光素酶活性显着降低，表明TRP568特别参与了与CHC的相互作用。此外，已经建立了一种使用精神细胞的两种杂交测定法，并且CHC表达组在CHC表达组中增加了，例如昆虫核心beta，这有助于促进转录激活和稳定。当筛选为第一年建造的两杂交系统和在第一年制造的硅系统，并筛选了与生活有关的物质（PPCP）筛选时，对激动剂的拮抗剂认识了一些药物和双酚化合物。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Quantitative analysis of the interaction of constitutive androstane receptor with chemicals and steroid receptor coactivator 1 using surface Plasmon resonance biosensor systems : A case study of the Baikal seal (Pusa sibirica) and mouse.

使用表面等离子共振生物传感器系统对组成型雄甾烷受体与化学物质和类固醇受体辅激活剂 1 的相互作用进行定量分析：贝加尔海豹（Pusa sibirica）和小鼠的案例研究。

DOI：
10.1093/toxsci/kfs288
发表时间：
2013
期刊：
Toxicol. Sci.
影响因子：
0
作者：
Dau;P.T.;Sakai;H.;Hirano. M.;Ishibashi;H.;Tanaka;Y.;Kameda;K.;Fujino;T.;Kim;E,Y. and Iwata;H.
通讯作者：
H.

RNA-seq analysis of the mysid crustacean transcriptome following exposure to naturally occurring 1,3,7-Tribromodibenzo-p-dioxin

暴露于天然存在的 1,3,7-三溴二苯并-对二恶英后，对糠虾甲壳类动物转录组进行 RNA-seq 分析