P-糖タンパク質を介したスフィンゴ脂質の新規選択的吸収機構の解明

通过 P-糖蛋白阐明鞘脂的新型选择性吸收机制

• 批准号: 07F07176
• 负责人: 平田 孝
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07F07176/
• 关键词: スフィンゴシン; アポトーシス; Caco-2細胞; スフィンゴイド塩基; HepG2; P-糖タンパク質; 消化管吸収; 海洋生物; ナマコ

スフィンゴシン結合タンパク質をヒト小腸上皮様細胞に分化させたCaco-2細胞から分離した。Caco-2細胞はDMEM培地で15-17日間培養して分化させた。分化したCaco-2細胞を40μmのスフィンゴシンで2時間処理した。ついで細胞を溶解し、DEAE-celluloseカラムによる分離に供した。分離した画分を集め、脂質を抽出した。脂質はスフィンゴシンのピークを検出するためにHPLC分析に供した。スフィンゴシンを検出した分画のタンパク質を3-kDa限外ろ過フィルターで処理した。得られたタンパク質は10%SDS-PAGEに供した。得られた単一バンドについて、現在アミノ酸シーケンスを行っている。。さらに、ナマコから調製したスフィンゴイド塩基のヒト肝臓由来HepG2細胞に対するアポトーシス誘導活性を検討した。スフィンゴイド塩基の作用としてDNA断片化が認められた。また、アポトーシス誘導に重要な役割を担うBax protein、GADD45、PPAR-γ、DR5が顕著にアプレギュレートされた。一方、phospho-AKT proteinは減少した。これらの結果は、スフィンゴイド塩基がHepG2細胞にアポトーシスを誘導したことを示す。

从分化为人类小肠上皮细胞中的CACO-2细胞中分离鞘粒蛋白结合蛋白。在DMEM培养基中培养Caco-2细胞并分化15-17天。用40μM链丁氏素处理分化的CACO-2细胞2小时。将细胞溶解并通过DEAE-纤维素柱分离。收集分离的绘画并提取脂质。脂质用于HPLC分析来检测链氨酸的峰值。用3 kDa多余的过滤器处理了脱丁氏菌分裂的蛋白质。将获得的蛋白质送达10％SDS-PAGE。目前正在为获得的单条带制造氨基酸序列。 。此外，研究了从海参制备制备的人肝碱的HEPG2细胞的凋亡诱导活性。 DNA碎片被视为松果体碱的作用。 Bax蛋白，GADD45，PPAR-γ和DR5在诱导凋亡中起重要作用。同时，磷酸化的蛋白质降低。这些结果表明，鞘脂碱已诱导HEPG2细胞凋亡。

项目成果

Sea cucumber sphingoid bases induce apoptosis and up-regulate Bax, GADD45 and PPAR-gamma in human hepatoma

海参鞘氨醇碱诱导人肝癌细胞凋亡并上调 Bax、GADD45 和 PPAR-gamma

• 发表时间: 2008
• 作者: Zakir Hossain;Tatsuya Sugawara;Takashi Hitara
• 通讯作者: Takashi Hitara