ヒストン脱アセチル化酵素SIRT1の細胞内局在の調節と心不全治療への応用

组蛋白脱乙酰酶SIRT1亚细胞定位调控及其在心力衰竭治疗中的应用

基本信息

批准号：
18790505
负责人：
丹野雅也
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では長寿蛋白ヒストン脱アセチル化酵素SIRT1の心不全での機能について検討し,一部の結果を既に報告した(J Biol Chem,2007)。さらに,その活性化薬レスベラトロールの心不全への効果をin vitro,in vivoの両面で検討中である。(1)SIRT1による細胞死の抑制EGFPにて標識した野生型SIRT1(WT),SIRT1の核移行シグナルに点変異を挿入することにより細胞質に局在するよう改変した変異体(mtNLS),または脱アセチル化酵素不活性変異体(H355Y)を作成し,親近し亜房に導入した。WT(核型)はアンチマイシンAやアンジオテンシンIIといった酸化ストレスによる細胞死を抑制するのに対して,この細胞保護効果はmtNLS(細胞質型)またはH355Yが導入された細胞では細胞保護効果は認められなかった。(2)SIRT1が酸化ストレスによる細胞死を抑制する機序WT(核型)およびmtNLS(細胞質型)をC2C12細胞に導入し内因性の酸化ストレス消去酵素の発現レベルを解析したところ,WT(核型)を導入した場合のみMnSODの発現が亢進した。またsiRNA法でMnSODの発現を抑制すると細胞死の抑制効果が消失した。(3)SIRT1活性化薬レスベラトロールの心不全に対する効果レスベラトロールを遺伝的拡張型心筋症の動物モデルであるTO2ハムスターに投与し,明らかな心不全が発症する生後35週齢の時点で通常の食餌のみを与えた個体と,心重量/体重比,左室心筋線維化,心筋BNPのmRNA発現,心エコーにより測定した左室駆出率を比較検討した。いずれの結果もレスベラトロールが心不全の重症度を軽減していた。

在这项研究中，我们研究了长寿蛋白组蛋白脱乙酰酶 SIRT1 在心力衰竭中的功能，并且已经报道了一些结果（J Biol Chem，2007）。此外，目前正在体外和体内研究白藜芦醇（其激活剂）对心力衰竭的影响。 (1) SIRT1对细胞死亡的抑制用EGFP标记的野生型SIRT1 (WT)，通过在SIRT1 (mtNLS)的核定位信号中插入点突变而修饰以定位于细胞质的突变体，或乙酰转移酶失活的突变体(H355Y) 被创建并引入到紧密的家族中。虽然WT（核型）抑制由抗霉素A和血管紧张素II等氧化应激引起的细胞死亡，但在用mtNLS（细胞质型）或H355Y转染的细胞中没有观察到这种细胞保护作用。 (2)SIRT1抑制氧化应激引起的细胞死亡的机制将WT(核型)和mtNLS(胞质型)引入C2C12细胞并分析内源性氧化应激清除酶的表达水平时，WT(核型)和mtNLS(胞质型)细胞质型）被引入C2C12细胞中，只有当引入MnSOD型）时，MnSOD的表达才会增强。此外，当使用siRNA方法抑制MnSOD表达时，细胞死亡抑制效果消失。 (3)SIRT1激活剂白藜芦醇对心力衰竭的影响。对TO2仓鼠(遗传性扩张型心肌病动物模型)施用白藜芦醇，测量心脏重量/体重比、左心室心肌纤维化、心肌BNP mRNA表达和左心室射血分数。通过超声心动图与仅喂食的动物进行比较。两项结果均表明白藜芦醇可降低心力衰竭的严重程度。