マウスES細胞から成熟内胚葉系細胞への選択的分化誘導法の確立とその応用の研究

小鼠ES细胞向成熟内胚层细胞选择性分化诱导方法的建立及应用研究

• 批准号: 18790459
• 负责人: 多田 真輔
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790459/
• 关键词: 内胚葉系細胞; マイクロアレイ; 分化誘導; 肝細胞

我々がすでに確立しているマウスES細胞から内胚葉系細胞への分化誘導系を用いて内中胚葉細胞を分化誘導した後、内胚葉系前駆細胞のみをソーティングにより抽出、さらにHNF6などの内胚葉系遺伝子の効率的な分化誘導法を検討した結果、いくつかの成長因子や液性因子を組み合わせ、かつある種のコラーゲンコーティングを施した培養皿でさらに分化誘導を行うことで、比較的効率的にHNF6などの内胚葉系遺伝子が誘導されることを証明した。現在のところ選択的に次なる段階の内胚葉系細胞を誘導することは可能となっていないが、成熟内胚葉系細胞への分化過程の次なるステップへ進む可能性が示されたことは、目的とする細胞を純化しかつ大量に獲得するという目的を果たすという意味において、重要な成果であったといえる。すでに確立した内胚葉分化誘導系の中で、大量に獲得できる細胞分画であるGoosecoid陽性Eカドヘリン陽性分画(内胚葉系前駆細胞分画)とGoosecoid陽性Eカドヘリン陰性分画(中胚葉系細胞)をDNAマイクロアレイでの比較解析にて、いくつかの遺伝子が内胚葉系前駆細胞分画に特異的に発現することを確認した。その中で、ある接着因子がマウス胚の内胚葉系細胞にのみ発現していることをin situ hybridizationにより証明した。この方法が内胚葉分化にかかわる遺伝子など、重要な分子の拾い上げに有効な方法であることが示された。また、Goosecoid陽性E-カドヘリン陽性分画、またその分画から確立した数ヶ月間継代培養可能な内胚葉系細胞株のin vivoでの応用研究では、マウスへの細胞移植実験での生着率が低く、更なる工夫が必要であると考えている。

使用我们已经建立的从小鼠ES细胞到内胚层细胞的分化诱导系统诱导内中胚层细胞分化后，我们通过分选仅提取内胚层祖细胞，并进一步提取HNF6等内胚层细胞的系统基因的高效分化诱导方法。我们的研究结果发现，通过组合多种生长因子和体液因子并在涂有某种类型胶原蛋白的培养皿中进一步诱导分化，可以相对有效地表达HNF6等内胚层基因。它可以被诱导。虽然目前还不能选择性地诱导下一阶段的内胚层细胞，但已经显示了分化过程中进入下一阶段以成熟内胚层细胞的可能性，这可以说是一个重要的结果。达到了纯化目的细胞并大量获得的目的。在已经建立的内胚层分化诱导系统中，可以使用Goosecoid阳性E-钙粘蛋白阳性级分（内胚层祖细胞级分）和Goosecoid阳性E-钙粘蛋白阴性级分（中胚层细胞级分）来大量获得。通过DNA微阵列，我们证实了一些基因在内胚层祖细胞部分中特异性表达。其中，我们通过原位杂交证明某些粘附因子仅在小鼠胚胎的内胚层细胞中表达。该方法被证明可以有效地拾取重要分子，例如参与内胚层分化的基因。此外，在对 Goosecoid 阳性 E-钙粘蛋白阳性级分和由这些级分建立的可传代培养数月的内胚层细胞系的体内应用研究中，我们研究了细胞移植实验中对小鼠的植入。率较低，需要采取进一步措施。