アナンダミドを水解する酸性アミダーゼの機能と生理的役割に関する分子生物学的研究

水解花生四烯酸酰胺酶的功能和生理作用的分子生物学研究

基本信息

批准号：
18790205
负责人：
坪井一人
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

長鎖脂肪酸のエタノールアミド(N-アシルエタノールアミン,NAE)は,虚血脳や心筋梗塞などの病変部位で著しく増加し,抗炎症作用を発揮する脂質メディエーターである。NAEのひとつであるアナンダミドは,カンナビノイド受容体の内因性リガンドであることも知られている。NAEの生体内レベルの調節に関与するNAE分解酵素としては,中性からアルカリ性で働く脂肪酸アミド加水分解酵素がよく知られているが,我々は最近,同じ反応をもっぱら酸性条件で触媒するアイソザイム(N-アシルエタノールアミン水解酸性アミダーゼ,NAAA)の遺伝子クローニングに成功した。本研究課題において平成18年度は,当該酵素の特異抗体を初めて作製し,免疫化学的解析を行い以下の成果を得た。作製した抗体の特異性を,組換えNAAA発現細胞を用いてWestern blottingにより確認した。ラット肺胞マクロファージや肺から単離したNAAAを同法で解析したところ,本酵素は糖蛋白であり,ペプチド鎖の限定分解を受けることが判明した。次に肺胞マクロファージを用いて免疫染色を行い,蛍光顕微鏡で観察したところ,本酵素はリソソームに局在していた。さらに,ラット肺の組織切片の免疫染色を行った結果,NAAA陽性細胞は主としてマクロファージであった。この結果に一致して,肺から単離した肺胞マクロファージは肺組織全体と比べて,はるかに高いNAAAの比活性と蛋白およびmRNAの発現レベルを示した。また,腹腔マクロファージにも強い発現が認められた。次に,ラット脳の免疫組織染色の結果,NAAA陽性細胞は,主として脳室内のマクロファージであった。一方,ミクログリアは陰性であった。以上の結果から,NAAAはラット組織中の種々のタイプのマクロファージで強く発現していることが明らかとなり,炎症や組織変性の場で蓄積するNAEの分解に貢献することが考えられた。

长链脂肪酸乙醇酰胺（N-酰胺氨基胺，NAE）是一种脂质介质，在缺血性脑和心肌梗塞等病变部位显着增加，并发挥抗炎特性。 Anandamide是NAES之一，也是大麻素受体的内源性配体。 Although the neutral to alkaline fatty acid amide hydrolase is a well-known NAE-degrading enzyme involved in the regulation of the in vivo level of NAE, we have recently successfully cloned the gene of isozyme (N-acylethanolamine hydrolytic acid amide, NAAA), which catalyzes the same reaction exclusively under acidic conditions.在该研究主题中，我们在2006年首次生产了该酶的特异性抗体，并进行了免疫化学分析以获得以下结果。通过使用重组NAAA表达细胞的蛋白质印迹证实了产生的抗体的特异性。从大鼠肺泡巨噬细胞和肺中分离出的NAAA的相同分析表明，该酶是一种糖蛋白，并且受到肽链的有限降解。接下来，使用肺泡巨噬细胞进行免疫染色，并在荧光显微镜下观察到。该酶定位于溶酶体。此外，对大鼠肺的组织切片免疫染色表明NAAA阳性细胞主要是巨噬细胞。与此结果一致，与整个肺组织相比，从肺部分离出的肺泡巨噬细胞显示出NAAA，蛋白质和mRNA表达水平的特异性更高。此外，在腹部巨噬细胞中也观察到了强表达。接下来，大鼠大脑的免疫组织化学染色表明NAAA阳性细胞主要是脑室内巨噬细胞。另一方面，小胶质细胞为阴性。以上结果表明，NAAA在大鼠组织中的各种巨噬细胞中强烈表达，并且认为它有助于NAE的降解，而NAE会在炎症和组织变性领域积累。