ミクログリア細胞におけるポリシアル酸の存在とその機能解析

小胶质细胞中聚唾液酸的存在及其功能分析

基本信息

批准号：
18770083
负责人：
佐藤ちひろ
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ポリシアル酸はシアル酸重合体の総称であり、魚卵糖タンパク質(PSGP)や神経細胞接着分子(NCAM)にその存在が知られている。ポリシアル酸の機能は、NCAMを中心に解析が進んでおり、かさ高い排除体積とポリアニオニックな性質による反接着作用を持つことが知られている。我々はこのミクログリア細胞に注目してポリシアル酸の存在検索および発現解析を行い、ミクログリア細胞株Ra2におけるポリシアル酸の存在をポリシアル酸に特異的な抗体12E3および特異的な酵素Endo-Nを用いて証明した。またRa2細胞に対してLPS刺激を行うとポリシアル酸が完全に消失することを見出した。またRa2細胞のLPS刺激によるポリシアル酸構造消失の分子機構を明らかにするために、分解過程に注目して実験を行った。シアル酸の分解に関わる酵素としてシアリダーゼに着目し、まず、シアリダーゼ遺伝子(Neu)の発現解析を行った。その結果、Neu2とNeu4が活性化により変動していることが分かった。さらに、実際にシアリダーゼ活性がポリシアル酸の消失に関わっていることを明らかにするために、シアリダーゼ阻害剤存在下でLPS刺激を行い、細胞表面のポリシアル酸の存在を調べた。同時に培地におけるシアリダーゼ活性を測定した。その結果、ポリシアル酸の消失にシアリダーゼが関わっていることが初めて明らかになった。一方、Ra2に対し、神経保護的な作用をもつサイトカインで刺激を行うと、ポリシアル酸構造が逆に増加する傾向があることも明らかにした。これまで、ポリシアル酸の素早い変動に関わる知見は得られておらす、ポリシアル酸構造の制御メカニズムの解明が期待される。

多氨酸是唾液酸聚合物的一般术语，其存在在鱼叶糖糖蛋白（PSGP）和神经元细胞粘附分子（NCAM）中已知。多氨酸的功能已主要用NCAM分析，并且由于其庞大的排除量和聚苯二酚特性，已知具有抗粘附性能。我们专注于该小胶质细胞，并对多层酸进行了搜索和表达分析，证明了使用多胶质细胞系RA2中的多酰胺酸存在使用多胶质细胞系RA2，使用多型酸特异性抗体12E3和特定的酶Endo-N。还发现，当LP刺激RA2细胞时，多氨酸完全消失。此外，为了阐明RA2细胞中LPS刺激的多氨酸结构丧失的分子机制，我们进行了一项针对降解过程的实验。首先，我们专注于唾液酸酶作为参与唾液酸降解的酶，并首先分析了唾液酸酶基因（NEU）的表达。结果，发现Neu2和Neu4由于激活而波动。此外，为了揭示唾液酸酶活性实际上参与了多氨酸的消失，在存在唾液酸酶抑制剂的存在下进行了LPS刺激，以检查细胞表面上的多氨酸的存在。同时测量培养基中的唾液酸酶活性。结果，首次揭示了唾液酸酶参与多氨酸的消失。另一方面，还发现，当用具有神经保护作用的细胞因子刺激RA2时，多氨酸结构倾向于反向增加。到目前为止，已经获得了有关多氨酸快速波动的知识，并且预计将阐明控制多氨酸结构的机制。