カドヘリンとオクルディンの両方のジャンクションに存在する蛋白質ZO-1の解析

钙粘蛋白和 Occludin 连接处蛋白质 ZO-1 的分析

• 批准号: 07780638
• 负责人: 伊藤 雅彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780638/
• 关键词: ZO-1; ZO-2; Occludin

本年度は、ZO-1結合蛋白質であるZO-2について解析を進めた。【マウスZO-2遺伝子の単離】ZO-2遺伝子についは、ヒト遺伝子が同定されていたため、その配列をもとにマウス肺のcDNAライブラリーをスクリーニングし、マウスZO-2遺伝子を単離した。【バキュロウイルスによる蛋白質発現】ZO-1およびOccludinなどとの結合様式を解析するために、バキュロウイルスを用いた蛋白質発現系にマウスZO-2遺伝子を導入した。これにより、多量に可溶性のZO-2蛋白質を得ることが可能となった。さらに、N末側とC末側に分けた形の分子についても発現させ、結合実験に使用した。【ZO-1およびOccludinとの結合実験】ZO-2は、免疫沈降によりZO-1と結合することが示されていたが、今回組み替え蛋白質を用いた実験系により、結合が直接的であることが具体的に明らかとなった。さらに、結合部位を絞り込むことを試みたところ、ZO-1のN末から約1/4の領域とZO-2のN末側が結合することを示す結果が得られた。一方、ZO-1の、Occludin細胞質領域に対する結合部位を調べた結果、ZO-2と配列上相同性のあるN末側であった。そこで、ZO-2のN末側とOccludinの結合を調べたところ、両者が直接結合しうることが示された。以上の結果から、ZO-2はZO-1と類似した構造を有し、少なくとも蛋白質間相互作用という点について構造上の相同性が共通の機能に反映していることが明らかとなった。

今年，我们继续分析 ZO-2，它是 ZO-1 结合蛋白。 [小鼠ZO-2基因的分离] 由于ZO-2基因的人类基因已被鉴定，因此根据其序列筛选小鼠肺cDNA文库，并分离小鼠ZO-2基因。 [通过杆状病毒表达蛋白质] 为了分析与ZO-1和Occludin的结合模式，我们使用杆状病毒将小鼠ZO-2基因引入到蛋白质表达系统中。这使得获得大量可溶性ZO-2蛋白成为可能。此外，该分子以分为N端和C端侧的形式表达并用于结合实验。 [与ZO-1和Occludin的结合实验] 通过免疫沉淀已显示ZO-2与ZO-1结合，但这次使用重组蛋白的实验系统表明该结合是直接的。此外，当我们试图缩小结合位点时，我们得到的结果表明，ZO-1 N末端的大约1/4区域与ZO-2 N末端侧结合。另一方面，对ZO-1与Occludin胞质区的结合位点的检查表明，其N末端侧与ZO-2具有序列同源性。因此，我们研究了ZO-2的N端侧与Occludin之间的结合，结果表明两者可以直接结合。上述结果表明，ZO-2与ZO-1具有相似的结构，并且结构同源性反映了共同的功能，至少在蛋白质-蛋白质相互作用方面。