アフリカツメガエル胚の神経の発生におけるアクチビンの役割

激活素在非洲爪蟾胚胎神经发育中的作用

• 批准号: 07780661
• 负责人: 内山 英穂
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780661/
• 关键词: 発生; 中胚葉誘導; 神経誘導; アクチビン; 脳下垂体; アフリカツメガエル

本年度の研究計画は、以下に順次記述するように、3つに分けることができる。1 抗アクチビン抗体を用いた神経系でのアクチビンの局在の研究抗アクチビンβA、およびβBに対する抗体を作成し、オタマジャクシおよび成体の神経系の切片に反応させたところ、抗βB抗体が脳下垂体に顕著に反応した。このβB抗体陽性の細胞を、各種下垂体ホルモンに対する抗体を併用して調べたところ、GH産生細胞、TSH産生細胞、およびLH/FSH産生細胞と同定された。2 △アクチビン受容体およびフォリスタチンの過剰発現と神経形成アクチビンの機能を阻害した際の神経形成への影響を調べるため、△(ドミナント・ネガティブ)アクチビン受容体mRNAを初期胚に注射した。その結果、背側・中胚葉域および背側・内胚葉域に注射した時に最も少ない注射量で影響が出た。予定内胚葉域に注射すると、頭部神経分化不全を引き起こしたことから、アクチビンは咽頭内胚葉の分化を介して神経系の発生に関与する可能性が考えられる。3 抗アクチビン受容体抗体の作成ツメガエルのアクチビン受容体のアミノ酸配列を、相同性の高いTGF-β受容体比較したところ、細胞内のプロリン・リッチ領域が特徴的であった。この領域をMAPペプチドとしてカスタム合成し、ウサギ皮下およびラットの足に免疫したが、よい抗体が得られなかった。このため、この抗体を用いた電顕免疫組織化学実験は行えなかった。現在MAPではなく通常のキャリヤ-蛋白とのコンジュゲート作成を検討している。

今年的研究计划可分为三个部分，如下所述。 1 使用抗激活素抗体研究激活素在神经系统中的定位 产生抗激活素βA和βB抗体并与蝌蚪和成虫的神经系统切片反应，反应显着。当使用抗各种垂体激素的抗体检查这些βB抗体阳性细胞时，它们被鉴定为GH产生细胞、TSH产生细胞和LH/FSH产生细胞。 2 Δ激活素受体和卵泡抑素的过表达与神经发生为了研究抑制激活素功能对神经发生的影响，将Δ(显性失活)激活素受体mRNA注射到早期胚胎中。结果，当注射到背侧中胚层区域和背侧内胚层区域时，以最低注射剂量看到效果。当注射到假定的内胚层区域时，激活素引起脑神经分化缺陷，表明激活素可能通过咽内胚层的分化参与神经系统的发育。 3 抗激活素受体抗体的创建 当将非洲爪蟾激活素受体的氨基酸序列与高度同源的TGF-β受体进行比较时，发现细胞内富含脯氨酸的区域具有特征性。该区域被定制合成为 MAP 肽，并在兔子和大鼠爪子中进行皮下免疫，但没有获得良好的抗体。因此，无法进行使用该抗体的电子显微镜免疫组织化学实验。我们目前正在考虑用常规载体蛋白而不是 MAP 创建缀合物。