絶滅危惧種スナヤツメの保護に関する研究

濒危沙七鳃鳗的保护研究

基本信息

批准号：
06J40022
负责人：
山崎輝美 (長井輝美)
金额：
$ 1.41万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

1)スナヤツメ北方種の産卵期(12〜2月)に人工授精を行い、飼育方法を検討した。スナヤツメの餌として、生息地に繁茂する水草を人工的に発酵させたものを初期餌料として与えた。この餌料を与えることにより、初期の生残率の低下を食い止めることができた。これらの個体群は現在(受精後4か月)も生存し、飼育下にある。2)低濃度のトリプシン溶液を先に作用させて卵膜の外側を膨潤、溶解後に孵化溶液を作用させたところ、作用後2-3時間で孵化時同様に卵膜の一部が溶解し、更に3時間後にはピンセットで容易に外せるほどに卵膜が柔軟化した。卵膜除去された胚は、1/10steinberg液で培養し孵化期までの生存が可能であった。3)スナヤツメ精子の凍結保存は、ドジョウで用いられている方法(Yasui et al.,2008)を参照して行った。その結果、メタノールを用いた群は、ドライアイス内で最長1分の保存までしか精子の活性が認められなかった。一方凍害阻害剤としてDMSOをもちいた群は、ドライアイス内で2分以上保存しても精子の活性が認められたが、直後に液体窒素に保存すると活性が認められなくなった。現在、凍害阻害剤としてグリセロールとウシ胎児血清(FBS)を検討中である。4)スナヤツメ北方種の成熟卵巣よりtotal RNAを抽出し、様々な生物種に共通して存在する生殖細胞因子についてdegenerate PCRを行った。その結果、生殖細胞因子と思われる明瞭なバンドが得られたため、現在このバンドから得られたDNAをシークエンス解析しているところである。

1）在Lionfish北部物种（12月至2月）的产卵季节进行了人工授精，并检查了繁殖方法。作为豹lamp虫的食物，在其栖息地中生长的人为发酵的水生植物作为初始饲料。喂食这种食物能够停止生存率的最初下降。这些人群目前还活着并且被囚禁（受精后4个月）。 2）首先施用低浓度的胰蛋白酶溶液来膨胀卵膜的外部，裂解后，施加了孵化溶液。动作后2-3小时后，部分卵膜溶解，如孵化时，鸡蛋膜变得更柔软，因此可以用镊子轻松将其除去。在1/10 Steinberg溶液中培养了从卵膜中去除的胚胎，并能够生存直到孵化阶段。 3）从豹子中使用的方法，对豹子的精子进行冷冻保存（Yasui等，2008）。结果，使用甲醇的组表明，仅在干冰中观察到精子活性长达1分钟。另一方面，包含DMSO作为冷冻抑制剂的组即使在干冰中储存超过2分钟后也会显示出精子活性，但此后不再观察到该活性后不再观察到液氮后立即储存。目前，正在研究甘油和胎牛血清（FBS）作为冻结剂。 4）从Lycaus Langeus北部物种的成熟卵巢中提取总RNA，并对通常存在于各种物种中通常存在的生殖细胞因子进行了退化PCR。结果，已经获得了似乎是生殖细胞因子的透明带，我们目前正在测序从该带中获得的DNA。