白血病幹細胞の自己複製を担う分子機構の解明

阐明白血病干细胞自我更新的分子机制

基本信息

批准号：
06J10464
负责人：
加藤裕子
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J10464/
关键词：
造血幹細胞ポリコーム遺伝子 STAT5 白血病幹細胞

项目摘要

白血病幹細胞の自己複製メカニズムを解析するために、白血病幹細胞の自己複製の維持に必須な分子群、Bmi1と恒常的活性化型STAT5を純化した造血幹細胞にレトロウイルスを用いて遺伝子導入し、DNAマイクロアレイを用いてBmi1と活性化したSTAT5によって制御される遺伝子群をプロファイリングした。白血病幹細胞の自己複製能増強に重要である候補遺伝子、あるいは白血病幹細胞から分泌され、ニッチ細胞に作用すると考えられる候補遺伝子をリストアップした。これらの遺伝子について、レトロウイルスやレンチウイルスによる強制発現系やRNAiノックダウン法と純化した造血幹細胞および前駆細胞を用い、in vitroおよび移植マウスにおけるin vivoの機能解析を行う予定である。さらにBmi1遺伝子欠損マウス、およびSTAT5コンディショナル遺伝子欠損マウス(TNAP-Cre ; STAT5^<flox/flox>)を準備した。造血幹細胞および前駆細胞を純化し、造血幹細胞にBCR-ABLを、前駆細胞にMLL-AF9を遺伝子導入し、骨髄移植を行い、移植マウスにおける白血病の発症をモニタリングする。この解析により、正常造血幹細胞で機能する自己複製分子(Bmi1、STAT5など)への依存性が造血幹細胞をターゲットとする白血病と前駆細胞をターゲットとする白血病で同様か否かを検証する予定である。

为了分析白血病干细胞的自我更新的机制，已纯化为BMI1纯化并组成性活化的STAT5的造血干细胞，这是一组对于维持白血病干细胞自我更新的必不可少的分子，使用逆转录病毒和基因通过BMI1和激活的stat5进行了coproged profecred cropecred croplays condects coplied contect。我们列出了候选基因，这些基因对于增强白血病干细胞的自我更新能力或白血病干细胞分泌并被认为对利基细胞作用的候选基因很重要。这些基因将使用逆转录病毒和慢病毒，RNAi敲低方法以及纯化的造血干细胞和祖细胞进行强制表达系统的体外和体内功能分析。此外，制备了患有BMI1基因缺乏的小鼠，而STAT5条件基因缺乏（TNAP-CRE； Stat5^<Flox/Flox>）的小鼠也得到了准备。纯化造血干细胞和祖细胞纯化，造血干细胞转移到BCR-ABL，祖细胞用MLL-AF9，骨髓移植转染，并监测移植小鼠中的白血病。该分析将验证在正常造血干细胞中起作用的自我更新分子（BMI1，STAT5等）的依赖性是否在白血病中是相同的，该白血病是靶向造血细胞和靶向祖细胞的白血病的。