糸状菌セルラーゼ潰伝子発現誘導機構に謁する分子生物学的研究

丝状真菌纤维素酶基因表达诱导机制的分子生物学研究

基本信息

批准号：
18880022
负责人：
谷修治
金额：
$ 1.75万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、糸状菌(Aspergillus acuieatus)におけるセルラーゼ遺伝子発現誘導機構を解明する事を目的として、まず、セルロースに応答してセロビオハイドロラーゼ遺伝子(cbhI)を発現誘導するシスエレメントを同定する事を目指した。種々の5'欠損ブロモーターの遺伝子発現誘導能をGUS遺伝子をレポーターとして解析した結果、翻訳開始点の上流467bpまでの欠損は遺伝子発現誘導能には影響を与えなかった。しかし、360bpまでの欠損で発現誘導能が約1/10に減少し、更に、191bpまでの欠損で消失した。そこで、影響の見られた領域に部位特異的変異を導入して詳細に解析した結果、-360〜-191間に存在する二カ所のシスエレメントが発現誘導に必要である事が明らかになった。その二カ所に共通な配列は、CCGN_2CCN_7GAであり、A.nidulans eglA遺伝子発現誘導に必須なシスエレメントと類似の配列である事が示された。この保存配列は、A.aculeatus cbhIプロモーター上の-467〜-360間にもう一カ所存在する事から、現在この領域にも部位特異的変異を導入し、改変プロモーターの遺伝子発現誘導能を解析中である。以上の解析により得られた知見を基に、同定されたシスエレメントを介した遺伝子発現誘導に関わる因子のスクリーニング系を現在構築しており、今後、糸状菌のセルラーゼ遺伝子発現誘導を調節する因子の同定に繋がるものと期待する。

在这项研究中，为了阐明丝状真菌（Aspergillus acuieatus）中纤维素酶基因表达的诱导机制，我们首先鉴定了响应纤维素 I 诱导纤维二糖水解酶基因（cbhI）表达的顺式元件。使用GUS基因作为报告基因分析了各种5'缺失的溴马达诱导基因表达的能力，结果，翻译起始位点上游高达467bp的缺失并不影响诱导基因表达的能力。然而，删除最多360bp时，诱导表达的能力降低至约1/10，此外，删除最多191bp时，诱导表达的能力消失。因此，通过将位点特异性突变引入受影响的区域并进行详细分析，可以清楚地发现，存在于-360和-191之间的两个顺式元件是表达诱导所必需的。两个位点之间的共同序列是CCGN_2CCN_7GA，其被证明是与诱导构巢曲霉eglA基因表达所必需的顺式元件相似的序列。由于该保守序列存在于棘孢子虫 cbhI 启动子上 -467 和 -360 之间的另一个位置，因此我们目前正在该区域引入位点特异性突变，并分析修饰后的启动子诱导基因表达的能力。基于上述分析获得的知识，我们目前正在通过已鉴定的顺式元件构建诱导基因表达诱导因子的筛选系统，将来我们将研究调节纤维素酶基因表达诱导的因子。我们希望这将有助于识别丝状真菌。

项目成果

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专著数量（0）

科研奖励数量（0）

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专利数量（0）

Aspergillus aculeatusにおけるsC選択マーカを用いた形質転換系の構築

使用棘孢曲霉中的 sC 选择标记构建转化系统

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Nishikawa Y;Kawase O;Vielemeyer O;Suzuki H;Joiner K.A;Xuan X;Nagasawa H.;Yusuke Takehana;Yusuke Takehana;Keita Tanaka;Takehana Yusuke;竹花佑介;足立浩美
通讯作者：
足立浩美