歯周病と動脈硬化の関連性に関する基礎研究

牙周病与动脉硬化关系的基础研究

基本信息

批准号：
18791593
负责人：
岩本義博
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的】近年、脂肪細胞からのアディポサイトカイン産生に、マクロファージが関与する可能性が報告された。すなわち、脂肪細胞周囲血管に集積したマクロファージに由来するサイトカインが脂肪細胞に働いて、アディポサイトカイン(脂肪組織由来生理活性物質)産生が元進し糖尿病や動脈硬化が一層増悪するという、脂肪細胞・マクロファージ相互作用説である。一方、高感度CRPの上昇が虚血性心疾患の予知因子として有用であるという事実に代表されるように、軽微な慢性感染症が、動脈硬化の増悪因子として働く可能性が示唆されている。これまでに、代表的なアディポサイトカインであるIL-6およびMCP-1に注目し、脂肪細胞・マクロファージ共培養系に低濃度のLPS刺激を加えた際、LPS無刺激時と比較してIL-6で100倍以上、MCP-1セ約50倍、それらの産生性が充進することを報告した(Yamashita, et. al.,Obesity,2007)。しかしながら脂肪細胞由来アディポサイトカインは多種多様であり、マクロファージとの相互作用でIL-6やMCP-1以外の分子の産生性に変化があるか否かについては未だ明らかでない。そこで今回、脂肪細胞・マクロファージ共培養系を低濃度のLPSで作用させた場合のサイトカイン産生性の変化を知るため、抗体アレイの手法を用いて産生量が著明に増加する分子の解析を行った。【方法】1.細胞および培養マクロファージ由来細胞株RAW264.7とマウス由来前駆脂肪細胞3T3-L1を使用した。3T3-L1を分化誘導し、誘導開始から14日後の細胞を分化脂肪細胞として用いた。2脂肪細胞・マクロファージの共培養およびLPS刺激分化した3T3-LI細胞(1x10^5cell/well)およびRAW264,7(5x10^4cell/well)を、0.4umの孔を有するメンブレンで上室と下室が分離され液性因子のみが各窒問を移動できるようにしたトランズウェルシステム(Corning)で共培養し、両細胞をE.coliLPS(1ng/ml)で24時間刺激した。3.培養上清中のサイトカイン量の抗体アレイによる解析回収した培養上清中のサイトカインを抗体アレイ(Ray Biotech,Inc)を用いて解析した。なお、産生性の変化が著明であったものに関しては、その量をEHSAキット(R&D)にて定量した。【結果】1.抗体アレイ法により、マクロファージ・脂肪細胞共培養系を低濃度細菌LPS刺激した際、先行研究で明らかにしたIL-6およびMCP-1ともに、RANTESとKCの産生性が元進していることが明らかになった。2.ELISA法にて定量したところ、LPS刺激のあるマクロファージ・脂肪細胞共培養系では無刺激の場合よりも、RANTESについては約40倍、KCについては350倍以上に産生が元進した。【結論および考察】脂肪細胞とマクロファージをLPS刺激することで、IL-6やMCP-1以外にRANTESおよびKCといったアディポサイトカインの産生性が元進した。RANTESは脂肪細胞へのT細胞リンパ球浸潤に、KCは脂肪細胞における毛細血管新生に関与する可能性がある。すなわち、歯周病のような慢性の微細感染症に由来する抗原が、脂肪細胞における炎症性変化を充進することによって、動脈硬化や糖尿病をさらに悪化させる可能性が示唆された。

[目的]近年来，据报道，巨噬细胞可能参与了脂肪细胞的脂肪材料的生产。也就是说，源自脂肪细胞过多的巨噬细胞的细胞因子在脂肪细胞中起作用，脂肪材料的成核（源自脂肪组织的月经活性）的发展，糖尿病和动脉粥样硬化的剂量进一步加剧了相互作用的理论。另一方面，由于高敏感性CRP的升高是缺血性心脏病的预测因素，因此建议较小的慢性传染病可以作为动脉硬化的加重因素。迄今为止，IL-6和MCP-1是典型的脂肪材料，并在脂肪细胞和巨噬细胞中增加了低浓度的LPS刺激。设定了50次，他们的生产将更加先进（Yamashita等，Ofession，2007年）。然而，脂肪细胞衍生的脂肪素技术是多种多样的，尚不清楚与巨噬细胞的相互作用是否改变了IL-6和MCP-1以外的分子的产生。因此，这次为了知道在低浓度的LPS中，在唇部细胞和巨噬细胞中的细胞因子产生的变化，使用抗体阵列方法显着增加了生产量的分子。 [方法] 1。细胞和培养巨噬细胞衍生的细胞共享RAW264.7和小鼠衍生的前体3T3-L1。衍生并诱导了3T3-L1，在诱导开始后14天使用细胞作为分化的脂肪细胞。 2。肉类细胞和巨噬细胞共培养和LPS刺激3T3-LI细胞（1x10^5cell/井）和RAW264,7（5x10^4cell/井）是具有0.4UM的Menblains，上室和下室是分离的只有液体因子才能移动每个亚硝酸盐问题，并在Transwel系统（Corning）中进行CO培养，并用E.Colilps（1 ng/ml）刺激两个细胞。 3.培养使用培养的抗体阵列（INC）分析细胞因子量中细胞因子量的细胞因子，并收集，收集，收集和收集。此外，由于生产率的变化很大，因此通过EHSA试剂盒（R＆D）量化了数量。 [结果] 1。在抗体阵列法中，当巨噬细胞和脂肪细胞共培养系统被低浓度的细菌LP刺激时，IL-6和MCP-1都在提前研究中揭示，生产中揭示了这一点rantes和kc。 2。ELISA方法的定量量使KC的批量高出约40倍，而KC的量超过350倍，而不是在巨噬细胞和具有LPS刺激的脂肪细胞培养系统中刺激。 [结论和考虑]通过刺激脂肪细胞和巨噬细胞的LPS，除了IL-6和MCP-1之外，脂肪材料图的产生（例如Rantes和KC）还提出了促进。 RANTES可能参与脂肪细胞中T细胞淋巴细胞的附带，KC可能参与脂肪细胞中的新毛细血管。换句话说，有人提出，诸如牙周疾病之类的慢性微观感染衍生的抗原可以通过促进脂肪细胞的炎性变化来进一步加剧动脉硬化和糖尿病。

项目成果

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high glucose up-regulates lipopolysaccharide-stimulated inflammatory cytokine production via c-jin N-terminal kinase in the monocytic cell line THP-1.

在单核细胞系 THP-1 中，高葡萄糖通过 c-jin N 末端激酶上调脂多糖刺激的炎症细胞因子的产生。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
J Endotoxin Res. 13(4)
影响因子：
0
作者：
Iwata H.;et. al.
通讯作者：
et. al.

Macrophage-adipocyte interaction : marked IL-6 production by co-cultures stimulated with LPS

巨噬细胞-脂肪细胞相互作用：LPS 刺激的共培养物显着产生 IL-6

DOI：
发表时间：
期刊：
Obesity (In press)
影响因子：
0
作者：
Ebisu;S;et. al.;Fukuhara M et al.;Kataoka K et al.;Sonoki K et al.;Takata Y et al.;Takata Y et al.;Yamashita A et al.
通讯作者：
Yamashita A et al.

マルチフルリスクファクターシンドロームを有する慢性歯周炎患者の一症例

慢性牙周炎合并多危险因素综合征一例