Analysis of regluration mechanism of protein protein interaction in xenobiotic system

外源系统中蛋白质-蛋白质相互作用的调节机制分析

• 批准号: 18570134
• 负责人: IKUSHIRO Shinichi
• 金额: $ 2.04万
• 依托单位: Toyama Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18570134/
• 关键词: Xenobiotics; UDP-glucuronosyltransferase; protein-protein interaction; 異物代謝; グルクロン酸

UDP-glucuronosyltransferases (UGT) in ER membranes can interact to form homo- and heterodimer and the interaction may play a role in the regulation of the glucuronidation including modulation of substrate specificity. We have previously indicated the heterodimeric formation between UGT1As and UGT2B1 in rat hepatic microsomes. We will focus on the regulation mechanism of the glucuronidation via oligomeric state of UGT in microsomal membranes. Immunopurification technique and western blot analysis using UGT isozyme specific peptide antibodies showed that rat UGT1A isozymes could interact with UGT2B1 but not other UGT2B isozymes, UGT2B2, 3, 6,and 12. UGT2B1 can interact with UGT1A1, 5, and 6 but not UGT2B isozymes. To analyze the functional role of the heterodimeric UGTs, we have constructed co-expression system of rat UGT1As and UGT2B in yeast. Co-expression of UGT isozymes was achieved by using two different expression vectors, genome integration plasmid and autonomously replicating plasmid. Western blot analysis using isozyme-specific antibodies confirmed the co-expression of UGT1As with UGT2B in yeast microsomes. Immunopurification of solubilized microsomes showed that UGT2B1 but not UGT2B3 was co-eluted with UGT1A, indicating the hetero-isozyme interaction of UGTs in yeast. To identify the region of UGT2B1 required for the interaction with UGT1A, we have constructed the co-expression system of chimeric UGT2B1 and UGT2B3 with UGT1A1. Co-immunoelution of UGT1A1 with UGT2B3/2B1 but not 2B1/2B3 showed clearly the involvement of C-terminal half of UGT2B1 for the interaction. Additional chimera UGT experiment with UGT1A1 and UGT2B1 suggested dimer formation of UGT through the C-terminal domain is functionally significant.

ER膜中的UDP-葡萄糖基转移酶（UGT）可以相互作用以形成同二聚体和异二聚体，并且这种相互作用可能在调节葡萄糖醛酸化的调节中起作用，包括调节底物特异性。我们以前已经表明在大鼠肝微粒体中UGT1AS和UGT2B1之间的异二聚体形成。我们将专注于微粒体膜中UGT的寡聚状态的葡萄糖醛酸化机理。使用UGT同工酶特异性肽抗体的免疫致病技术和蛋白质印迹分析表明，大鼠UGT1A同工酶可以与UGT2B1相互作用，而其他UGT2B同工酶，UGT2B2、3、6和12。GUGT2B1也可以与UGT1A1，5和6，但不是UGT2B的相互作用。为了分析异二聚体UGT的功能作用，我们在酵母中构建了大鼠UGT1A和UGT2B的共表达系统。通过使用两个不同的表达矢量，基因组整合质粒和自主复制质粒来实现UGT同工酶的共表达。使用同工酶特异性抗体的蛋白质印迹分析证实了UGT1A与酵母微粒体中UGT1A的共表达。溶解的微粒体的免疫治疗表明，UGT2B1而不是UGT2B3与UGT1A共洗脱，表明UGT在酵母中的异质异化相互作用。为了确定与UGT1A相互作用所需的UGT2B1区域，我们与UGT1A1构建了嵌合UGT2B1和UGT2B3的共表达系统。 UGT1A1与UGT2B3/2B1但不是2B1/2B3的共免疫淘汰清楚地表明，UGT2B1的C末端一半参与了相互作用。对UGT1A1和UGT2B1进行的其他嵌合式UGT实验表明，通过C末端结构域形成UGT的二聚体在功能上很重要。

项目成果

シトクロムP450 3A4(CYP3A4)とUGT1Aサブファミリーの相互作用について

细胞色素 P450 3A4 (CYP3A4) 和 UGT1A 亚家族之间的相互作用

• 发表时间: 2007
• 作者: Akhter;T.;Zhao;L.;Kohda;A.;Mio;K.;Kanamaru;S. & Arisaka;F.;追崎俊也
• 通讯作者: 追崎俊也

Caco-2細胞におけるフラボノイド代謝に関わる第二相酵素群の発現

Caco-2细胞中参与类黄酮代谢的II相酶的表达

• 发表时间: 2007
• 作者: 金丸周司;有坂文雄;室田佳恵子
• 通讯作者: 室田佳恵子

シトクロムP4503A4 (CYP3A4)とUGTIAサブフアミリーの相互作用について

细胞色素 P4503A4 (CYP3A4) 与 UGTIA 亚家族之间的相互作用

• 发表时间: 2007
• 作者: Ueno;T.;Koshiyama;T.;Tsuruga;T.;Goto;T.;Kanamaru;S.;Arisaka;F.;and Watanabe;Y.;追崎俊也
• 通讯作者: 追崎俊也

ヒトUDP-グルクロン酸転移酵素分子種特異的なペプチド抗体の作成

人 UDP-葡萄糖醛酸转移酶分子种类特异性肽抗体的创建

• 发表时间: 2006
• 作者: Morimoto;K.;Yamashita;E.;Kondou;Y.;Lee;Soo Jae.;Arisaka;E.;Tsukihara;T.;Nakai,M.;吉田修治;生城真一
• 通讯作者: 生城真一

ヒトUDP-グルクロン酸転移酵素による部位特異的なケルセチン抱合反応の解析

人 UDP-葡萄糖醛酸基转移酶的位点特异性槲皮素缀合反应分析

• 发表时间: 2007
• 作者: Hara;S.;Motohashi;K.;Arisaka;F.;Romano;P. G. N.;Hosoya-Matsuda;N.;Kikuchi;N.;Fusada;N.;and Hisabori;T.;生城真一;向後克哉
• 通讯作者: 向後克哉