精神遅滞の遺伝子異常の解明;神経発生における三塩基対繰り返し配列を持つ遺伝子検出

阐明精神发育迟滞的遗传异常；检测神经发生中具有三碱基对重复序列的基因

• 批准号: 06770585
• 负责人: 山形 崇倫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770585/
• 关键词: 精神遅滞; 脆弱X症候群; 三塩基対繰り返し配列

1。ヒト胎児脳のcDNAライブラリーを(CAG)の三塩基対繰り返し配列を持つブライマ-とファージベクターのプライマーでPCRし、(CAG)三塩基繰り返し配列をもつ遺伝子をスクリーニングし、プラスミドに組み込み、大腸菌を形質転換し、クリーニングした。クローニングした遺伝子の塩基配列を決定し、ホモロジー検索を行った。その結果、(CAG)の三塩基対繰り返し配列を持つ既知の遺伝子4個と、未知の遺伝子が20個検出された。これらの遺伝子の一部について、FISH法で染色体上の位置を決定した。現在、残りの遺伝子について、FISH法を行うとともに、それらの遺伝子の機能を解析している。2。家族性の精神遅滞を有する患者より、リンパ球分離し、DNA抽出した。DNAを制限酵素(EcoRI)処理し、サザンブロットし、StB 12.3をプローベとして脆弱X染色体遺伝子上の(CCG)の三塩基対繰り返し配列の延長の有無を検討した。32家系を検討したところ、(CCG)三塩基対繰り返し配列の延長を示したものはなく、FRAXAの異常による脆弱X症候群は検出されなかった。よって、脆弱X染色体の頻度は低いものと推定された。

1.使用含有(CAG)三碱基对重复序列的引物和噬菌体载体引物对人胎脑cDNA文库进行PCR，筛选出具有(CAG)三碱基对重复序列的基因，将其整合到质粒中，然后注入大肠杆菌进行转化和清洗。确定克隆基因的核苷酸序列并进行同源性搜索。结果，检测到4个已知基因和20个具有(CAG)三碱基对重复序列的未知基因。使用 FISH 方法确定其中一些基因的染色体位置。目前，我们正在对其余基因进行FISH并分析其功能。 2.从家族性智力低下患者中分离淋巴细胞并提取 DNA。用限制性酶（EcoRI）处理DNA，进行Southern印迹，并使用StB 12.3作为探针检查脆性X染色体基因上是否存在三碱基对重复序列（CCG）的延伸。当对 32 个家系进行检查时，没有一个显示出 (CCG) 三碱基对重复序列的延伸，并且没有检测到由于 FRAXA 异常而导致的脆性 X 综合征。因此，脆弱 X 染色体的频率估计较低。