無血清培養による臼歯歯胚の歯根形成、特に歯顎部の細胞分化・形態形成に関する研究

无血清培养研究磨牙牙胚牙根形成，特别是颌部细胞分化和形态发生

基本信息

批准号：
06771602
负责人：
藤原尚樹
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Iwate Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771602/
关键词：
無血清培養器官培養マウス臼歯歯根形成 EGF ITS Premix

项目摘要

本年度は無血清完全合成培地による器官培養系を用いマウス臼歯の歯根形成について2つの点から検討を試みた。また本実験系は片側の下顎骨と歯小嚢を伴うマウス第一臼歯歯胚を無血清のBGJb培地、O_2,N_2,CO_2の混合ガスを用いて、長期培養することによって行った。1、マウス臼歯の歯根形成初期におけるEGFの影響:in vivo系から生後4-12日、培養系から生後4日令歯胚を6-18日間培養した歯胚の歯顎領域を摘出、RT-PCR法を用いて検索した。すべての試料からEGFの発現が確認でき、本in vitro系のin vivoと同様の歯胚の発育が裏付けられた、次に生後4日令からの摘出歯胚に0、5、10、15、50ng/ml EGFを添加し、最大28日間培養した。15ng/ml以下の量では顕著な変化が認められなかったが、50ng/mlのEGF添加群では主に外エナメル上皮等の上皮成分において細胞増殖を促進すると思われる像が得られた。萌出や歯根形成など他の点についての影響は現在さらに詳細な観察を行っている。2、培養下での有細胞セメント質形成:生後14日令からの歯胚を本器官培養系を用いて培養(最大42日間)することにより、歯根象牙質上に有細胞セメント質様構造が形成された。その際、血清補助因子ITS Premix(Insulin,Transferrin,Selenious acid)を添加したものは無添加群より組織の保存状態もよく、4〜7日程度セメント質形成も促進される様に思われた。しかし対照群や実験群それぞれに骨の石灰化を促進するβ-glycerophosphate(1mM)を添加してもこれまでのところセメント質形成に対して著しい促進効果は見られていない。むしろβ-glycerophosphate添加群では異所性の石灰化が見られた。培養下でのセメント質形成については今後もさらに検討を加えていき、セメント質形成機構の解明に努めたい。

今年，我们尝试使用无血清完全合成培养基的器官培养系统从两个角度研究小鼠磨牙的根形成。此外，该实验系统是通过使用无血清BGJb培养基和O_2、N_2和CO_2的混合气体对小鼠第一磨牙的一侧下颌骨和牙囊进行长期培养。 1、EGF对小鼠臼齿牙根形成早期的影响：体内系统，4-12天龄牙胚，培养系统，4天龄牙胚培养6-18天，牙齿下颌区域被移除，RT-使用PCR方法进行搜索。所有样品中均证实有 EGF 表达，支持在该体外系统中与体内相似的牙胚发育，并培养长达 28 天。在低于15ng/ml的剂量下没有观察到显着变化，但在50ng/ml EGF添加组中，获得了似乎主要在上皮成分（例如外釉质上皮）中促进细胞增殖的图像。我们目前正在对萌出和牙根形成等其他方面的影响进行更详细的观察。 2. 培养中细胞牙骨质的形成：通过使用该器官培养系统培养14天大的牙胚（最多42天），在已形成的牙根牙本质上形成细胞牙骨质样结构。此时，添加血清辅因子ITS Premix（胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸）的组织比未添加组保存得更好，并且牙骨质形成似乎被促进约4至7天。然而，即使在对照组和实验组中添加促进骨矿化的β-甘油磷酸（1mM），迄今为止也没有观察到对牙骨质形成的显着促进作用。事实上，在补充β-甘油磷酸的组中观察到异位钙化。我们将继续研究培养条件下牙骨质的形成，努力阐明牙骨质形成的机制。