無血清培養による臼歯歯胚の歯根形成、特に歯頸部の細胞分化・形態形成に関する研究

无血清培养研究磨牙牙胚牙根形成，特别是牙颈部细胞分化和形态发生

基本信息

批准号：
05771483
负责人：
藤原尚樹
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Iwate Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771483/
关键词：
初期歯根形成器官培養無血清完全合成培地マウス臼歯歯胚 EGF RT-PCR

项目摘要

本年度は歯根形成初期における歯頸領域の発達と初期セメント質形成について、無血清完全合成培地による器官培養系を用い形態学的に検索を進めると共に、分子生物学的にEGFの発現に対する予備実験を行った。またそれぞれについて、in vivoとの比較を行った。1、歯胚の培養:無血清BGJb培地で片側の下顎骨と歯小嚢を伴うマウス第一臼歯歯胚の長期間培養を試みた。培養は昨年度行った培養法の検討に基づき生後4日歯胚を8,12,14,18,20,28,35,42日間行った。2、形態学的観察:培養12日目の歯胚の形態はin vivoで生後10日目に見られるものと同様に発達し、培養14〜18日にかけて歯頸領域に象牙質形成と、その外側にHertwig上皮鞘の断裂が観察された。また上皮鞘細胞間隙には微細なcollagen fibrilsも観察され、初期セメント質形成を思わせる像が得られた。しかし20〜42日の長期間培養を行った歯胚は、それ以上の顕著な形態的発達は見られず、またin vivoで歯根象牙質表面に見られるtoluidine blueに濃染する層は培養期間すべてにおいて確認できなかった。3、分子生物学的手法による予備実験:分子生物学的手法に接する機会が得られたので、当初の予定を変更し予備実験を行った。すなわちin vivoとin vitro両方の系で、EGFの発現について継時的にRT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)法で検討した。in vivo系は生後4、8、12日、またin vitro系は培養6、10、14、18日目の歯頸領域についてRT-PCR法に供し、双方同様にEGFの発現を確認した。このことから本実験系が初期歯根形成における観察に有用であることも裏付けられた。今後は酵素抗体法やRT-PCR法を用いて歯根形成に関わる内因性の各種因子の発現について、また各種因子の添加による影響を検討していきたい。

今年，我们将利用无血清全合成培养基的器官培养系统，对牙根形成早期的颈部发育和早期牙骨质形成进行形态学研究，并对表达进行初步实验。从分子生物学的角度来看EGF。我们还将每个结果与体内结果进行了比较。 1.牙胚培养：尝试在无血清BGJb培养基中长期培养单侧下颌骨和牙囊的小鼠第一磨牙牙胚。根据去年进行的培养方法研究，将四天大的牙胚培养了8、12、14、18、20、28、35和42天。 2.形态观察：培养第12天牙胚形态发育与体内出生后第10天观察到的相似，培养第14-18天牙本质形成及其在颈部的形成。在外部观察到赫特维希上皮鞘的撕裂。在上皮鞘细胞之间的空间中还观察到细小的胶原纤维，让人想起早期牙骨质形成的图像。然而，长时间培养20至42天的牙胚没有表现出进一步明显的形态发育，并且在体内牙根牙本质表面观察到的甲苯胺蓝染色层在培养期间没有变化。无法确认一切。 3、利用分子生物学技术进行初步实验：由于有机会体验分子生物学技术，我改变了原来的计划，进行了初步实验。也就是说，使用RT-PCR（逆转录聚合酶链反应）在体内和体外系统中随时间检查EGF的表达。体内系统于出生后第4、8、12天，体外系统于培养第6、10、14、18天对宫颈区域进行RT-PCR，EGF表达量为两种情况都得到了类似的证实。这证实了该实验系统对于观察早期牙根形成是有用的。今后，我们希望通过酶抗体法和RT-PCR方法研究牙根形成中涉及的各种内源因子的表达以及添加各种因子的效果。