酸化LDLが個々の単球の浸潤及び内皮細胞VE-cadherin動態に及ぼす影響

氧化LDL对个体单核细胞浸润和内皮细胞VE-钙粘蛋白动力学的影响

• 批准号: 17700411
• 负责人: 橋本 謙
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17700411/
• 关键词: 動脈硬化; 血管内皮細胞; 単球; PECAM-1; VE-cadherin; 浸潤動態; 酸化LDL; 循環生理学

動脈硬化初期過程における我々の研究から,酸化LDLは血管内皮細胞間隙分子の発現制御(PECAM-1の増強,VE-cadherinの抑制)により細胞間隙を単球が浸潤し易い状態に変化させ,それにより,単球の接着→浸潤開始のstepが特異的に促進されることが明らかとなった(Hashimoto K et al., Atherosclerosis 2007,in press).本研究では,単球浸潤時のPECAM-1,VE-cadherinの分子動態を生細胞において直接観察することを目的として,当初は3種類の分子(酸化LDL,単球CD14,VE-cadherinor PECAM-1)の同時抗体染色を想定していた.しかし,膜貫通タンパクであるPECAM-1(VE-cadherin)の抗体による細胞外ドメイン標識は,単球浸潤の障害になる可能性がある為,代替法として,これらの分子の細胞内ドメインに別色の蛍光タンパク(GFP, DsRed)を付加した組み換えベクターを作製し,内皮細胞及び単球に発現させることにより,細胞外での分子相互作用を阻害せずに両分子の動態を直接観察することを試みた.本年度は,PECAM-1に着目し,常法(RNA抽出,逆転写,PCR増幅,ベクターligation,コロニー選択,プラスミド精製,塩基配列確認)によりPECAM-1-GFP(緑)及びPECAM-1-DsRed(赤)の発現ベクターを構築した.次に,様々な遺伝子導入法を検討した結果,Nucleofection法(Amaxa社)により高効率・低毒性にてベクターを導入・発現させることに成功した.現在,これらを発現させた細胞の機能確認(形態,増殖能,発現分子の局在確認,分子量確認等)を行っており,これらの細胞を用いて,共焦点レーザー顕微鏡による3次元浸潤動態観察を行い,両分子の役割を直接的に検証する予定である.

我们在动脉粥样硬化的早期阶段的研究表明，氧化的LDL将细胞间隙改变为一种状态，即单核细胞可能通过控制血管内皮细胞间隙分子的表达而可能浸润，从而将PECAM-1（PECAM-1）（PECAM-1的增强和VE-Cadherin的增强）和抑制作用促进了Monocyte Alocyte sation and Incotiation（k. El）（ER）（ER）的抑制（增强VE-Cadherin）。动脉粥样硬化2007年，印刷中）。在这项研究中，我们旨在直接观察活细胞单核细胞浸润期间PECAM-1和VE-钙粘着蛋白的分子动力学，最初有三种不同的分子（氧化的LDL，单核细胞CD14和VE-钙粘着蛋白），我们已经设想为Pecam-1染色。但是，具有跨膜蛋白PECAM-1（VE-钙粘蛋白）抗体的细胞外域标记可以干扰单核细胞浸润，因此，我们在这些分子的细胞内结构域中具有不同的颜色荧光蛋白（GFP）。我们试图直接观察两个分子的动力学，而不会通过与添加的DSRED（DSRED）产生重组载体来抑制细胞外分子相互作用，并在内皮细胞和单核细胞上表达它们。在今年，我们专注于PECAM-1，并使用常规方法（RNA提取，逆转录，PCR扩增，矢量结扎，菌落选择，质粒纯化，质粒纯化，基本序列确认），对PECAM-1-GFP（绿色）和PECAM-1-1-DSRED（RED）表达矢量进行表达。接下来，使用核反理方法（AMAXA）研究了各种基因转移方法，并成功地引入并表达了高效率和低毒性。当前，证实了表达这些的细胞的功能（形态，增殖能力，表达分子的定位，分子量确认等），并使用这些细胞，我们计划使用共焦激光显微镜观察侵袭动力学，以直接验证两个分子的作用。

项目成果

第1章 腎臓病の分子生物学 3.ナノ/マイクロテクノロジーからみた内皮細胞と単球のinteraction、「先端医療シリーズ31 腎臓病 -診断と治療の最前線」

第一章肾脏疾病的分子生物学3.纳米/微米技术视角下的内皮细胞与单核细胞的相互作用，《高级医学系列31肾脏疾病-诊治前线》

• 发表时间: 2005
• 作者: 片岡則之;橋本謙;梶谷文彦(分担執筆)
• 通讯作者: 梶谷文彦(分担執筆)

Flow-induced hardening of endothelial nuclei as an intracellular stress-bearing organelle

流动诱导的内皮细胞核硬化作为细胞内的应激细胞器

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Biomechanics 38
• 作者: S Deguchi;K Maeda;T Ohashi;M Sato
• 通讯作者: M Sato

Involvement of aldosterone and mineralocorticoid receptors in rat mesangial cell proliferation and deformability

• DOI: 10.1161/01.hyp.0000154681.38944.9a
• 发表时间: 2005-04-01
• 期刊: HYPERTENSION
• 影响因子: 8.3
• 作者: Nishiyama, A;Yao, L;Abe, Y
• 通讯作者: Abe, Y

第1章 腎臓病の分子生物学 3.ナノ/マイクロテクノロジーからみた内皮細胞と単球のinteraction. 先端医療シリーズ 31 腎臓病 -診断と治療の最前線

第一章 肾脏疾病的分子生物学 3. 纳米/微米技术视角下的内皮细胞和单核细胞的相互作用 31 肾脏疾病 - 诊断和治疗的最前沿。

• 发表时间: 2005
• 作者: 北川輝彦;周 向栄;原 武史;藤田広志;横山龍二郎;近藤浩史;兼松雅之;星 博昭;橋本 謙;Ken Hashimoto;Shinji Deguchil;Ken Hashimoto;Ken Hashimoto;Akira Nishiyama;Akira Nishiyama;S Deguchi;Ken Hashimoto;Ken Hashimoto;片岡則之
• 通讯作者: 片岡則之

Oxidized LDL specifically promotes the initiation of monocyte invasion at cell-cell junctions by upregulating PECAM-1.

氧化 LDL 通过上调 PECAM-1 特异性促进细胞-细胞连接处单核细胞侵袭的启动。

• 发表时间: 2006
• 期刊: FASEB J. 20・5
• 作者: 北川輝彦;周 向栄;原 武史;藤田広志;横山龍二郎;近藤浩史;兼松雅之;星 博昭;橋本 謙;Ken Hashimoto;Shinji Deguchil;Ken Hashimoto
• 通讯作者: Ken Hashimoto