動脈硬化の予防及び治療を目的とした単球の内皮下侵入メカニズムの解明-内皮細胞本体を通る単球の侵入経路の生細胞における3次元連続解析-

阐明单核细胞内皮下侵袭防治动脉硬化的机制 - 三维连续分析活细胞内单核细胞通过内皮细胞体的侵袭途径 -

基本信息

批准号：
15700341
负责人：
橋本謙
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kawasaki Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は動脈硬化初期の重要なKey Eventである,単球の内皮への接着及び内皮下への侵入動態の単一細胞レベルでの生細胞を用いた3次元連続観察を実現する為,共焦点レーザー顕微鏡を用い,下記2点の改良により新しい実験系を構築した.(1)非常に薄いコラーゲンゲル層(厚さ30-50μm)をガラスボトムディッシュ上に作製することにより,倒立顕微鏡下での高倍率直接観察を可能とした.(2)HUVEC(ヒト臍帯静脈血管内皮細胞)及びヒト末梢血より単離した単球を生きたまま適切に蛍光ラベルすることにより両細胞の活性を最大限に維持することに成功した(Hashimoto et al., Atherosclerosis, 2004).この実験系により,"内皮細胞本体を通る単球の侵入経路の解析"を試みた.一部で内皮細胞本体に陥入して侵入しようとする単球が観察され,電子顕微鏡観察等により一部で報告されている経路が存在する可能性が示唆された.それ以外の大部分の単球は内皮細胞に接着後,細胞間隙の方向に移動(crawling)し,細胞間隙を通って内皮下に侵入した.このような単球の侵入経路の違いは,1)局所の内皮細胞の細胞間隙を含めた力学的・化学的特性の違い,2)個々の単球の機動性・侵入活性,細胞表面分子の発現状態の違いによることが想定され,これらについて詳細に検討することが今後の課題である.また,本実験系を発展させ,動脈硬化誘発の主要因子である酸化LDLを内皮下のコラーゲンゲル層に混入する動脈硬化病態モデルを構築した.蛍光抗体法により酸化LDL分布を観察した結果,酸化LDLは内皮下だけでなく,一部は内皮細胞内にも取り込まれており,実際の病態に近い状態を再現できていることを確認した.現在,本実験系の特性を生かし,酸化LDLが個々の単球動態(侵入活性,移動速度等)に及ぼす影響について詳細な検討を行っている.

我们是早期动脉硬化的重要关键。为了实现利用活细胞在单细胞水平上三维连续观察单核细胞对内皮的粘附事件和内皮下侵袭的动态，我们利用共聚焦激光显微镜观察了以下两点，通过改进，进行了新的实验。 (1)将非常薄的胶原凝胶层(30-50μm厚)置于玻璃瓶中。 (2)以适当的方式制备活体状态的HUVEC(人脐静脉血管内皮细胞)和从人外周血中分离的单核细胞，通过对细胞进行荧光标记，成功地最大限度地维持了两种细胞的活性(桥本)。等人，动脉粥样硬化， 2004)，我们试图“分析单核细胞通过内皮细胞体的侵入途径”。等人的一些研究中报告的途径可能存在。大多数其他单核细胞是单核细胞粘附细胞后，向细胞间隙方向移动（爬行），通过细胞间隙侵入内皮下。单核细胞进入途径的差异如下： 1）包括局部内皮细胞的细胞间隙 2）差异单个单核细胞的迁移和侵袭活性，以及细胞表面分子的表达状态。据推测，这可能是由于氧化LDL，它是诱发动脉硬化的主要因素，未来的挑战将是详细研究这些问题，我们构建了动脉硬化病理模型。使用观察氧化LDL分布的结果。荧光抗体法结果，我们确认氧化LDL不仅在内皮下，而且部分被内皮细胞吸收，并且我们能够再现接近实际病理状况的状态。我们正在对氧化LDL的影响进行详细研究。个体单核细胞动力学（侵袭活性、迁移速度等）。

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Involvement of aldosterone and mineralocorticoid receptors in rat mesaneial cell proliferation and deformability

醛固酮和盐皮质激素受体参与大鼠系膜细胞增殖和变形

DOI：
发表时间：
期刊：
Hypertension (In press)
影响因子：
0
作者：
Ken Hashimoto;Ken Hashimoto;Ken Hashimoto;Akira Nishiyama
通讯作者：
Akira Nishiyama

Direct observation and quantitative analysis of spatiotemporal dynamics of individual living monocyte during transendothelial migration

单个活单核细胞跨内皮迁移过程中时空动态的直接观察和定量分析

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Jpn.J.Physiol 54・Suppl.
影响因子：
0
作者：
Ken Hashimoto;Ken Hashimoto
通讯作者：
Ken Hashimoto

Direct single-cell imaging of monocyte transendothelial migration with living samples

使用活样本对单核细胞跨内皮迁移进行直接单细胞成像

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
医用電子と生体工学 42・Suppl.1
影响因子：
0
作者：
Ken Hashimoto;Ken Hashimoto;Ken Hashimoto
通讯作者：
Ken Hashimoto

Direct observation and quantitative analysis of spatiotemporal dynamics of individual living monocytes during transendothelial migration

活单核细胞跨内皮迁移过程中时空动态的直接观察和定量分析

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Atherosclerosis 177・1
影响因子：
0
作者：
Ken Hashimoto
通讯作者：
Ken Hashimoto

片岡則之: "マウスES幹細胞の分化に及ぼすメカニカルストレスの影響"生体医工学. 41,Suppl.1. 45 (2003)

Noriyuki Kataoka：“机械应力对小鼠 ES 干细胞分化的影响”生物医学工程 41，增刊 45 (2003)。

DOI：
发表时间：
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