Notchシグナル伝達系を介したエナメル上皮腫の分化制御機構の解明

Notch信号系统介导的成釉细胞瘤分化调控机制的阐明

• 批准号: 17791471
• 负责人: 川野 真太郎
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791471/
• 关键词: エナメル上皮腫; Notch シグナリング; 細胞分化; Notchシグナル伝達系; amelogenin; alkalin phospatase; alkaline phosphatase(ALP); エナメル上皮腫; Notch シグナリング; 細胞分化; Notchシグナル伝達系; amelogenin; alkalin phospatase; alkaline phosphatase(ALP)

エナメル上皮腫細胞株(AM-1)を用いたNotchシグナル伝達系の機能解析Notch1レセプターの細胞外ドメインを切り離したtruncated type Notch1(tNotch1)がリガンド非依存的に細胞内シグナルを恒常的に活性化させることが知られている。前年度の研究では、tNotch1を強制発現させるplasmid DNAをAm-1細胞内に遺伝子導入することでNotch1過剰発現モデルの作成を試みた。本年度は、Notch1を過剰発現するAM-1細胞(tNotch AM-1)を用い、Notch1がコードする遺伝子群の解析を行なった。RT-PCRおよびWestern blotting法にてNotchシグナル系の下流に存在するHES1、HES5、Hey1の発現がコントロール群と比べ有為に強く認められた。さらに、アンチセンス法およびsiRNA法により、Notchシグナル系をノックダウンすると、amelogenin、ameloblastinなどの歯原性上皮のマーカーの発現が有意に上昇した。一方、HES1、HES5、Hey1の発現は有意に低下していた。また、エナメル上皮腫組織標本において、tNotch1の発現を免疫組織学的に検索したところ、ほとんどの細胞において発現が認められなかった。これらの実験結果から、エナメル上皮腫ではNotchシグナル伝達系が何らかの原因により十分に機能していないため、分化が進まず、未分化のまま増殖していることが示唆された。

使用搪瓷上皮瘤细胞系（AM-1）对Notch信号系统进行功能分析，众所周知，分离Notch1受体的细胞外结构域的截短类型Notch1（TNOTCH1）会强制地激活非指数与配体无关的方式中的细胞内信号。在上一年的研究中，我们试图通过将质粒DNA（强力表达TNOTCH1）转染到AM-1细胞中来创建Notch1过表达模型。今年，我们使用过表达Notch1的AM-1细胞（TNOTCH AM-1）分析了Notch1编码的基因。位于Notch信号系统下游的HES1，HES5和HEY1的表达明显比对照组的表达更强。此外，通过反义和siRNA方法敲低NOTCH信号系统，显着增加了鼻上皮上上皮细胞中标记物的表达，例如氨基蛋白蛋白和杏仁蛋白。另一方面，HES1，HES5和HEY1的表达显着降低。此外，当对牙釉质上皮瘤组织样品中进行TNOTCH1表达进行免疫组织化学搜索时，在大多数细胞中未观察到表达。这些实验结果表明，在搪瓷上皮瘤中，由于某种原因，Notch信号系统无法正常运行，并且分化不会进展并增殖未分化。