胎盤形成を制御し、癌抑制機能をもつ新規遺伝子NECC1の解析

NECC1的分析，一种控制胎盘形成并具有癌症抑制功能的新基因

基本信息

批准号：
17791124
负责人：
浅野間和夫
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

正常マウス胎盤におけるNECC1の発現は胎齢8.0-9.5日にかけ海綿状栄養膜細胞層(SPT)と栄養膜巨細胞層(TGC)に限局して発現しており、NECC1欠損変異マウスの解析では胎齢9.5日よりコントロールと比べてTGCの過形成とSPTの低形成を認めた。栄養膜幹細胞をCdx2の発現で検討したところ変異マウスでは発現細胞が著明に減少していた。In-vitroでの機能解析のため分化モデルとしてRcho-1細胞、マウス栄養膜幹細胞株(TS細胞株)を用いた。TSに分化刺激を与えると、巨細胞への分化に伴いNECC1の発現を認めた。NECC1発現アデノウィルスベクターを作製し、Rcho-1細胞、TS細胞株に遺伝子導入し、分化刺激を与えたところ分化に対し抵抗性を示した。この結果は細胞の形態、DNA量の半定量、分化マーカー発現の検討により導かれた。また、NECC1の下流に位置する分子であるSRF(serum response factor)との関連を探るため、SRF結合部位を用いたレポーター活性を測定したところRcho-1細胞の分化に伴い活性が上がり、NECC1や優性ネガティブ型SRF(DN-SRF)の共導入により抑制された。SRFはNECC1と同様、SPTとTGCで発現しており、免疫沈降法により両者の関連性が示唆された。TGCの特異的分泌ホルモンであるPl1の転写制御領域を用いたレポーターアッセイを行ったところ分化刺激に伴い上昇する活性が野生型SRF(wt-SRF)の共導入により促進され、NECC1、DN-SRFの共導入により抑制された。Wt-SRF、DN-SRFをTSに導入し、導入細胞を発現ベクターについたタグにより同定、形態を観察したところ、wt-SRF導入細胞は分化刺激を与えなくても巨細胞への分化を示し、DN-SRF導入細胞は逆に分化を抑制する結果で会った。以上から、NECC1はSRFを介する栄養膜細胞の分化シグナルにネガティブフィードバックを与え、栄養膜細胞の分化を調整する機能を有すると示唆された。

在第8.0-9.5天，将NECC1在正常小鼠胎盘中的表达位于海绵滋养细胞层（SPT）和滋养细胞巨细胞层（TGC），而NECC1缺陷突变体的分析显示出与对照组相比，NECC1缺乏的突变体显示了TGC的增生和SPT的SPT的炎症。当检查滋养细胞干细胞的CDX2表达时，突变小鼠中表达细胞的数量显着减少。为了在体外的功能分析，将RCHO-1细胞和小鼠滋养细胞细胞系（TS细胞系）用作分化模型。当给出TS分化刺激时，观察到NECC1表达，分化为巨细胞。制备了表达NECC1的腺病毒载体，并将基因转移到RCHO-1细胞和TS细胞系中，当刺激分化时，它显示出对分化的抗性。这些结果来自细胞形态，半定量DNA含量和分化标记的表达。此外，为了研究与NECC1下游分子的关联，使用SRF结合位点测量了报告基因活性，并且随着RCHO-1细胞的分化而增加了活性，并通过共同引入NECC1和主要的负SRF（DN-SRF）抑制。像NECC1一样，SRF在SPT和TGC中也表示，免疫沉淀表明两者之间存在关系。使用PL1的转录控制区，TGC的特定分泌激素进行了报告基督测定，并通过野生型SRF（WT-SRF）的共同引导促进了与分化刺激的活性增加，并通过对NECC1和DN-SRF的共同介入。 WT-SRF和DN-SRF被引入TS中，并使用附着在表达载体上的标签鉴定了细胞，并观察到形态。 WT-SRF转导的细胞在没有分化的情况下显示出分化为巨细胞的分化，而DN-SRF转导的细胞被发现抑制分化。从以上提出，NECC1通过SRF提供了对滋养细胞分化信号的负反馈，并且具有调节滋养细胞分化的功能。