Aβ投与及び外傷性軸索損傷モデルにおける骨髄幹細胞移植:電気生理学的解析

创伤性轴突损伤模型中 Aβ 给药和骨髓干细胞移植：电生理分析

• 批准号: 17790966
• 负责人: 相原 英夫
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790966/
• 关键词: βアミロイド; ラット海馬切片; axonal stretch injury

whole-cell patch-clumpにてNMDA, AMPA, GABA, Achなどの神経伝達物質の電流解析を行うため、マウス海馬の錐体神経細胞の単離培養およびラット海馬切片の組織培養を行った。培養条件のうち、培養温度については従来より指摘されているように、34度の低温の方が特に組織培養系で生存率が良い事が確認できた。血清濃度と至適培養温度について比較検討し、血清濃度は通常より高い20%が実験に適している事が判明した。培養後一週間でβアミロイド投与の有無による神経細胞死の評価を行い、神経細胞死が誘導されることが示唆された。同様の実験系を海馬スライス培養系を用いて確立する。また、axonal stretch injury modelをラット皮質からの神経培養を用いて行ったが、現時点で有意な結果を得るところまで解析は進んでいない。今後の追加実験が必要である。βアミロイドに関連して、体循環からの骨髄由来細胞の脳損傷部位への動員をGFP遺伝子導入マウスの骨髄細胞を5FU処置マウスの末梢血に注入しキメラマウスを作成、collagenaseを線条体に定位的に注入し脳内出血を作製し解析した。出血後day28まで脳切片中の骨髄由来細胞の出現と消退について観察した。出血後1-3日では血腫内に末梢血中のGFP(+)の白血球が観察された。免疫染色にて、血腫周辺にて一過性にvWF(+)の管腔形成に骨髄由来細胞は関与した。また、Iba-1(+)細胞の出現をday8から認めこれはday28まで続いた。一方、GEAP、Neu-Nに対しては骨髄由来細胞は陰性であった。骨髄由来細胞が神経系細胞へ分化する可能性については議論が多いが、今回の実験系では組織学的レベルで神経系細胞への分化は確認できなかった。

为了使用全细胞膜片簇对 NMDA、AMPA、GABA 和 Ach 等神经递质进行当前分析，我们分离并培养了小鼠海马锥体神经元和组织培养的大鼠海马切片。在培养条件中，如前所述，已证实在34度的低温下成活率较好，尤其是在组织培养系统中。血清浓度与最适培养温度的对比研究表明，20%的血清浓度较正常值更适合实验。培养1周后，对施用和不施用β-淀粉样蛋白的情况下的神经细胞死亡进行评价，表明诱导了神经细胞死亡。将使用海马切片培养系统建立类似的实验系统。此外，使用大鼠皮层的神经元培养物进行了轴突拉伸损伤模型，但目前分析尚未进展到获得显着结果的程度。未来还需要进行更多的实验。与β-淀粉样蛋白相关，通过将GFP基因转染小鼠的骨髓细胞注射到5FU治疗小鼠的外周血中，将来自体循环的骨髓来源的细胞动员到脑损伤部位，以产生嵌合小鼠，并使用胶原酶转移到纹状体进行立体定向注射以产生脑内出血并进行分析。观察脑切片中骨髓来源细胞的出现和消失直至出血后第28天。出血后1-3天，血肿内观察到外周血GFP(+)白细胞。免疫染色显示骨髓来源的细胞参与了血肿周围vWF(+)管腔的短暂形成。此外，从第8天开始观察Iba-1(+)细胞的出现，并持续到第28天。另一方面，骨髓来源的细胞 GEAP 和 Neu-N 呈阴性。关于骨髓源性细胞分化为神经系统细胞的可能性存在很多争议，但在该实验系统中，无法在组织学水平上证实分化为神经系统细胞。