チトクロームc酸化酵素欠損良性乳児型の分子病態解析

良性婴儿型细胞色素c氧化酶缺乏症的分子病理学分析

基本信息

批准号：
17790738
负责人：
三牧正和
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

チトクロームc酸化酵素欠損良性乳児型の6例にミトコンドリアDNA上のtRNA-Glu(グルタミン酸特異的転移RNA)領域の同一塩基の点変異を見いだした。tRNA-Gluはaminoacyl acceptor stemの末端にCCA配列が付加され、アンチコドンの転写後修飾をうけコドンの認識能力を獲得し、アミノアシル化転移酵素によりglutamateをチャージしてアミノアシル化が完成する。患者ではいずれかの過程に異常が生じていると考え、まず患者生検筋のtRNA量が低下していることを明らかにした。またアミノアシル化には異常がないことをacid PAGE等で示した。さらにtRNAをRNaseで部分消化しDNA変異が実際にtRNAの配列異常をもたらしていることを確認した。本年度は症例数をさらに増やしたうえで変異を確認し、同変異がtRNAの生合成、機能発現にもたらす異常を検出するために、以下の検討を行った。1.Acryloylamino phenyl mercuric chloride gelを用いたノーザンブロットにより、tRNAのアンチコドン修飾には異常がないことを確認した。2.培養細胞を用いて、メチオニンラベルよるタンパク合成能解析を行い、電子伝達系タンパクの異常を示唆する結果をえた。以上より、発見した変異はアンチコドン修飾には影響を与えず、変異のもたらすtRNAの量的減少によりタンパク合成能の異常をきたすことが病因となっていると考えた。自然軽快する機序については検討中であるが、チトクロームc酸化酵素のアイソフォームの乳児型から成人型への変化の関与を想定している。

发现Chitocholome C与六种婴儿型婴儿型婴儿类型的六例tRNA-GLU（谷氨酸特异性过渡RNA）区域的相同碱基不同。 TRNA-GLU在氨基酰基受体茎的末端具有CCA序列，在退休后获得Kodon的识别能力，并为氨基酰基转化的酶充电以完成氨基酰基。在患者中，其中一个过程是异常的，首先揭示了患者活检的tRNA量正在减少。另外，酸页面等表明氨基化的异常。此外，已经证实了tRNA用RNase部分消化，而DNA突变实际上带来了tRNA序列。在这个财政年度，进一步增加了病例的数量，并进一步检查了突变，并进行了以下检查以检测TRNA的生物合成和功能的异常。 1。使用丙烯酰氨基氯米汞壁画凝胶的北印迹证实，tRNA反登起修饰中没有异常。 2。使用培养细胞使用蛋氨酸标记进行蛋白质合成分析，表明电子传输蛋白质异常。从以上，我们认为发现的突变不影响抗kodon修饰，并且是由于蛋白质合成能力的异常，这是由于突变引起的tRNA的定量降低而引起的。尽管正在考虑自然光的机理，但假定它与从婴儿类型变为成年类型的奇特克罗c氧化酶有关。