視神経脊髄型多発性硬化症の自己抗原同定

视神经脊髓多发性硬化症自身抗原的鉴定

基本信息

批准号：
17790568
负责人：
中島一郎
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

1.2次元電気泳動を用いた抗原検索ラットおよび正常ヒト脳のタンパク質を各々の可溶性で分画し、プロテインAビーズと共有結合させた多発性硬化症患者血清IgGと反応させ、血清IgGと特異的に反応した蛋白を2次元電気泳動法にて泳動し、銀染色を行った。染色スポットを患者と健常者との間で比較を行ったが、患者に特異的な共通した蛋白質は同定されなかった。2.HEQ293培養細胞を用いた血清抗アクアポリン4(AQP4)抗体の同定ヒトAQP4の全長cDNAを作成しプラスミドベクターに組み入れた後、HEQ293細胞に導入し培養増殖させた。8倍希釈した患者血清をAQP4発現HEQ293細胞に反応させ、間接蛍光抗体法にて血清中の抗AQP4抗体の有無を確認した。疑い例を含む多発性硬化症患者148例の血清において抗AQP4抗体の測定を行い、33例で抗AQP4抗体が陽性であった。33例はいずれも視神経脊髄型多発性硬化症あるいはそのハイリスク群であった。抗体価の経時的変化の検討において、治療後の抗AQP4抗体価の低下が一部の患者で認められ、再発時に抗体価が上昇することが確認された。3.視神経脊髄型多発性硬化症における髄液ニューロフィラメントH鎖(NfH-SMI35)の定量視神経脊髄型多発性硬化症24例、通常型多発性硬化症24例、再発性脊髄炎4例、および筋萎縮性側索硬化症9例の髄液中のリン酸化ニューロフィラメントH鎖(NfH-SMI35)レベルをELISA法にて測定した。髄液NfH-SMI35レベルは視神経脊髄型の25%(24例中6例)で異常高値であったのに対し、通常型および再発性脊髄炎の髄液NfH-SMI35レベルはすべて正常であった。視神経脊髄型における髄液NfH-SMI35レベルの異常頻度は通常型と比較して有意に高く、その平均値も著しく上昇していた。髄液NfH-SMI35レベルが異常高値の6例のEDSSの中央値は6.5で比較的障害の程度は重かったが視神経脊髄型全体において髄液NfH-SMI35レベルと重症度、罹病期間、再発頻度、髄液所見、MRI所見、などとの間には有意な相関は認められなかった。通常型との比較において、視神経脊髄型では軸索障害あるいは神経細胞死や軸索変性がより強く病態に関与していることが示唆される。

1.使用二维电泳进行抗原搜索根据各自的溶解度分级大鼠和正常人脑蛋白，并与共价结合蛋白A珠的多发性硬化症患者血清IgG反应，以特异性检测血清IgG。通过二维电泳迁移反应的蛋白质。和银色染色。尽管对患者和健康对照之间的染色点进行了比较，但没有发现患者特有的常见蛋白质。 2.使用培养的HEQ293细胞鉴定血清抗水通道蛋白4(AQP4)抗体制备人AQP4的全长cDNA并将其插入质粒载体，然后导入HEQ293细胞并培养和生长。将稀释8倍的患者血清与表达AQP4的HEQ293细胞反应，并使用间接荧光抗体法确认血清中是否存在抗AQP4抗体。对148名多发性硬化症患者（包括疑似病例）的血清进行了抗AQP4抗体检测，其中33名患者的抗AQP4抗体呈阳性。所有 33 名患者均患有神经脊髓多发性硬化症或患有该疾病的高风险。在检查抗体滴度随时间的变化时，证实了一些患者在治疗后抗AQP4抗体滴度下降，并且在复发时抗体滴度增加。 3、视脊髓多发性硬化症脑脊液神经丝H链（NfH-SMI35）测定视脊髓多发性硬化症24例，常规多发性硬化症24例，复发性脊髓炎4例，磷酸化神经丝H链（NfH-SMI35）通过 ELISA 测定了 9 名肌萎缩侧索硬化症患者脑脊液中的水平。 25% 的神经脊髓炎病例（24 例中有 6 例）脑脊液 NfH-SMI35 水平异常高，而所有常规和复发性脊髓炎病例的脑脊液 NfH-SMI35 水平均正常。视神经脊髓型脑脊液NfH-SMI35水平异常频率显着高于正常型，且平均值也显着升高。 6例脑脊液NfH-SMI35水平异常高的病例的中位EDSS为6.5，损害程度相对较重，但脑脊液NfH-SMI35水平、严重程度、病程、复发频率，未观察到显着相关性脑脊液检查结果、MRI 检查结果等之间与正常类型相比，轴突损伤、神经元细胞死亡和轴突变性在视神经脊髓型的病理学中更为强烈地参与。

项目成果

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Alteration of Cystatin C in the cerebrospinal fluid of multiple sclerosis

多发性硬化症脑脊液中胱抑素 C 的变化

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Ann Neurol (In press)
影响因子：
0
作者：
岩本禎彦;宇津見七海;近江俊徳;後藤孝也;坂本敦司;中山一大;中山一大;中山一大;岩本禎彦;後藤孝也;坂本敦司;北村歌奈子;近江俊徳;近江俊徳;ルバグワスレン・ムンフトルガ;Watanabe S;Miyazawa I;Watanabe S;Nakamura M;Nakashima I
通讯作者：
Nakashima I

Establishment of a New Sensitive Assay for Anti-Human Aquaporin-4 Antibody in Neuromyelitis Optica