ユビキチンリガーゼSmurf2の転写調節メカニズムの解明

阐明泛素连接酶Smurf2的转录调控机制

• 批准号: 17790550
• 负责人: 大橋 温
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790550/
• 关键词: Smurf2; ユビキチンリガーゼ; TGF-β; シグナル伝達; 転写; Smad; PI3 kinase-Akt経路

腎線維化動物モデルとして、片側尿管結紮(UUO)マウスモデルを作成し、結紮時をControlとし、結紮後7日、14日、28日のタイムコースをとり、その組織学的検討、TGF-β、Smurf2、Smad2などのmRNA・蛋白発現量を比較検討した。結紮し、タイムコースをとった側の腎臓は、Controlの腎臓に比較して、PAS染色にて、尿細管の萎縮と拡張、及び間質に炎症性細胞浸潤を認め、マッソントリクローム染色において、著しい腎臓の線維化を呈した。更に時間経過により進行性に腎臓の線維化の程度は増加した。細胞外基質産生増加を誘導する多機能サイトカインであるTGF-β mRNAの発現量を、RealtimeRT-PCRを用いて検討したところ、Controlに比較し有意に増加しており、また時間経過とともに有意に増加していた。ユビキチンリガーゼであるSmurf2は、Controlに比較し有意に、また時間経過とともに有意に、Realtime RT-PCRでmRNAの発現量が増加していた。更にWestern blotでの蛋白レベルの発現量も、Controlに比較し有意に、また時間経過とともに有意に増加した。Smurf2によりユビキチン依存性に分解されることが知られているSmad2は、Controlに比較し、また時間経過とともにRealtime RT-PCRでmRNAの発現量は増加していたが、Western blotでの蛋白レベルの発現量はControlに比較し、更には時間経過とともに低下しており、翻訳後修飾反応を受けている可能性が示唆された。

作为肾纤维化动物模型，制作单侧输尿管结扎（UUO）小鼠模型，以结扎时程为对照，时程为结扎后7天、14天、28天。我们比较了 mRNA 和蛋白质（如 β、Smurf2 和 Smad2）的表达水平。与对照肾脏相比，结扎侧肾脏在PAS染色和时间过程中均显示肾小管萎缩、扩张，间质有炎症细胞浸润，Masson三色染色显示患者出现明显的肾纤维化。此外，肾纤维化的程度随着时间的推移逐渐增加。当我们使用实时 RT-PCR 检查 TGF-β mRNA（一种诱导细胞外基质产生增加的多功能细胞因子）的表达水平时，我们发现它与对照相比显着增加，并且随着时间的推移也显着增加。通过实时 RT-PCR 检测，与对照相比，Smurf2（一种泛素连接酶）的 mRNA 表达水平显着增加，并且随着时间的推移显着增加。此外，与对照相比，蛋白质印迹中蛋白质的表达水平显着增加，并且随着时间的推移也显着增加。已知 Smad2 会以泛素依赖性方式被 Smurf2 降解，在实时 RT-PCR 中，与对照相比，随着时间的推移，Smad2 的 mRNA 表达量有所增加，但 Western blot 中的蛋白水平表达水平进一步下降与对照相比，时间较长，表明它可能正在经历翻译后修饰反应。

项目成果

Transcriptional induction of Smurf2 ubiquitin ligase by TGF-β

• DOI: 10.1016/j.febslet.2005.03.069
• 发表时间: 2005-05-09
• 期刊: FEBS LETTERS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Ohashi, N;Yamamoto, T;Kitagawa, M
• 通讯作者: Kitagawa, M