腸管出血性大腸菌におけるタイプIII蛋白質分泌装置と鞭毛の共役発現制御機構

肠出血性大肠杆菌Ⅲ型蛋白分泌器与鞭毛的耦合表达控制机制

基本信息

批准号：
17790297
负责人：
伊豫田淳
金额：
$ 2.18万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790297/
关键词：
腸管出血性大腸菌 GrlR GrlA 鞭毛遺伝子発現制御 LEE タイプIII 蛋白質分泌装置べん毛病原性 O157

项目摘要

昨年度の研究から、腸管出血性大腸菌(EHEC) O157が保有する病原性遺伝子群であるLEE (locus of enterocyte effacement)の正の発現制御因子であるGrlAは運動器官である鞭毛の発現抑制因子であることが明らかとなった。GrlAの鞭毛レギュロンへの作用点を解析する目的で、鞭毛レギュロンの3つのクラス(クラス1-3)の代表的なオペロン(flhD,flgA,fliC)の転写調節領域とプロモーターを欠くlacZとの融合体をプラスミド上で構築し、その転写発現量をLacZの活性として測定した。その結果、GrlAは鞭毛マスターオペロンの転写抑制に作用していることが明らかとなった。この発現制御の生物学的意義を探るため、転写調節領域を除くflhDオペロン全体(flhDとflhCを含む)を発現可能な低コピープラスミドを構築し、野生型のEHEC O157株に導入した。この組換え体は鞭毛を構成的に発現するが、コントロールベクターで形質転換した野生株と比較すると、培養細胞(HeLa)への接着能が著しく低下し、LEEの機能発現に依存して起こるアクチン凝集塊も全く確認されなかった。したがって、GrlAによる鞭毛発現抑制は、EHECが細胞接着するために必須の遺伝子発現制御であると推定された。GrlAによるLEE遺伝子群の発現活性化はセントラルレギュレーターであるLerの発現上昇を介して起こるが、鞭毛レギュロンの抑制効果はler欠損株でも起こることから、この現象はLerに非依存的に起こるものと結論された。

从去年的研究中，Grla是Lee的阳性表达控制因子（肠肠细胞效应的基因座），该因子由肠道出血大肠杆菌（EHEC）O157拥有，是鞭毛表达的控制因素，是运动器官。很清楚。为了分析GRLA标记的头发调节的影响，标记的调节剂的两个类（1-3级）（FLHD，FLGA，FLGA，FLIC）和缺乏启动子的LACZ的效果。并测量其转移表达为LACZ的活性。结果，据揭示了GRLA对标记的大师操纵子的转移控制作用。为了探讨该表达控制的生物学意义，可以安装了转移调整区域的整个FLHD操纵子（包括FLHD和FLHC）可以表达的低拷贝质粒，并将其引入野生型EHEC EHEC O157共享中。尽管这种重组体是由柔软的头发组成的，但与对照载体转化的野生库存相比，培养细胞的粘附能力显着降低，这取决于Lee的功能表达总体质量。因此，据估计，GRLA对flaging头发表达的抑制是EHEC细胞粘附的基因表达控制。通过GRLA对LEE基因的振兴是通过LER表达的兴起而发生的，但是Flating调节的抑制作用是在LER中无限期地发生的。