腸管出血性大腸菌O157のLEE遺伝子群の発現調節機構

肠出血性大肠杆菌 O157 中 LEE 基因表达的调控

基本信息

批准号：
12770148
负责人：
伊豫田淳
金额：
$ 1.28万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770148/
关键词：
腸管出血性大腸菌 LEE領域発現調節

项目摘要

腸管出血性大腸菌O157の宿主への接着過程に必須な遺伝子群は、LEE : Locus for Enterocyte Effacementにコードされている。LEE遺伝子群の発現制御を行っていると考えられる遺伝子を含むDNA断片をいくつか単離し、その塩基配列を解析したところ、そのうちの一つに機能の詳細が不明な、転写制御因子と部分的に相同性を示す遺伝子が存在することが明らかとなった。この遺伝子にカナマイシン耐性遺伝子を挿入した突然変異遺伝子をin vitroで構築して染色体上に戻し、突然変異体を単離した。LEE領域内にコードされる宿主作用因子の一つをコードするespB遺伝子の活性を測定したところ、上記の突然変異によってespBの転写発現が減少することが明らかとなった。EspBに対するモノクローナル抗体を用いてEspBの分泌量及び合成量を測定したところ、上記の突然変異の効果が再確認された。LEE遺伝子群のセントラルレギュレーターとして機能しているler遺伝子の転写発現量における上記の突然変異の効果を解析する目的で、ler遺伝子の転写調節領域を1コピーのプロモーター検出ベクターに挿入したブラスミドを作製した。このプラスミドを持たせたO157株中において上記の突然変異を導入したところ、その転写量が低下することが明らかとなった。従って、上記の突然変異によるespB遺伝子の砿写発現量の低下はler遺伝子を介した効果であることが判明した。LEE遺伝子群の発現制御を行っていると考えられる他のDNA配列を同定したところ、perC遺伝子を含むDNA断片が存在した。perCは、腸管出血性大腸菌と同じくLEE遺伝子群を保有する腸管病原性大腸菌においてlerの正の転写制御遺伝子としてすでに特徴付けがなさているが、腸管出血性大腸菌においてもlerの転写活性を正に制御していることが示唆された。

对于肠道出血性大肠杆菌O157宿主的粘合剂过程至关重要的遗传基团是Lee中的编码：肠肠细胞效果的基因座。部分地，其中一个在其中一个中是未知的，其中一个是未知的，其中一些DNA片段被认为可以控制Lee基因的表达控制。同源性。用卡纳霉素耐药基因插入该基因中的突变基因在体外建立并返回到染色体中，并分离出变体。编码在Lee区域中编码的ESPB基因的活性的测量表明，上述突变减少了ESPB的转录。当使用与ESPB的单克隆抗体测量ESPB的分泌和复合量时，重新确定了上述突变的效果。为了分析上述突变在LER基因转录中的作用，LER基因的转录是LEE基因组的中心调节剂，创建了LER基因转录调节区域的铜晶型铜甲米德（Brassmide），创建了一个副本启动子检测载体。。使用该质粒的O157股票中上述突变的引入表明，转移量减少。因此，发现由于上述突变，ESPB基因中ESPB基因的量减少是通过LER基因的作用。当鉴定出被认为控制Lee基因的表达控制的其他DNA序列时，就有一个含有PERC基因的DNA片段。 PERC已经被描述为LER中LE的阳性转录控制基因，该肠道致病性大肠杆菌持有Lee基因组以及肠道出血性大肠杆菌。