アルブミン遺伝多型を利用した抗酸化型組換えアルブミンの分子設計

利用白蛋白遗传多态性进行抗氧化型重组白蛋白的分子设计

基本信息

批准号：
17790127
负责人：
安楽誠
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は,当研究室において構築された遺伝子組換え技術を基に,安全性及び有効性に優れた,特に抗酸化能を有するアルブミン製剤を開発することを目的として企図された.抗原性を考慮して,ヒト異型アルブミン(variant)に着目し,1残基置換variantの抗酸化能を評価した.その結果,ヒト血清アルブミン(HSA)の抗酸化能に関与するアミノ酸残基として,^3His,^<122>Val,^<410>Arg及び^<505>Gluが,HSA自身の構造及び機能を維持する上で必須なアミノ酸残基として機能している可能性が強く示唆された.そこで,特に抗酸化能が顕著であった^<410>ArgをCysに変異したvariant R410Cに着目し,yeast-E.coliのシャトルベクターpHIL-D2上でAOX1のプロモーター下流にシグナル配列とポリA配列を含むHSAcDNAを挿入した発現ベクターを作製し,部位特異的に変異させた後(^<410>ArgをCysに置換),このベクターでPichia pastoris(GS115株)を形質転換し,BMMY培地培養後,培地上清より60%硫安分画により濃縮を行い,Blue Sepharose CL-6Bを用い,R410Cを精製した.アルブミンミュータントR410Cにおいて,その構造・体内動態特性について検討した結果,CDスペクトル法により,変異による構造変化は観察されなかった.また,ラットにR410Cを静脈内投与し血中半減期を検討した結果,血漿由来のアルブミン(pHSA)と比較して若干の消失の促進が観察された.以上の結果から,遺伝子組換えアルブミンとして設計されたR410Cは,ヒト由来のvariantであるため,抗原性の心配がないことに加えて,抗酸化能という新たな機能を有したアルブミン製剤として機能する可能性が強く示唆された.

本研究旨在基于本实验室开发的基因重组技术，开发一种安全性和有效性优异、尤其具有抗氧化能力的白蛋白制剂，我们以人源变异白蛋白为研究对象，对单残基的抗氧化能力进行了评价。结果，我们发现人血清白蛋白（HS）作为参与A)的抗氧化能力的氨基酸残基，^3His、^<122>Val、^<410>Arg和^<505>Glu是维持HSA本身的结构和功能所必需的氨基酸。因此，^<410>Arg突变为Cys的变体具有特别显着的抗氧化能力。针对R410C，我们将含有信号序列和polyA序列的HSAcDNA插入到酵母-大肠杆菌穿梭载体pHIL-D2上的AOX1启动子下游，并经过位点特异性突变（^<410>Arg替换）来创建表达载体与 Cys），毕赤酵母与该载体转化毕赤酵母(GS115菌株)，在BMMY培养基中培养后，将培养基上清液通过60%硫酸铵分级分离和Blue Sepharose浓缩。使用CL-6B纯化R410C。检查白蛋白突变体R410C的结构和药代动力学特性的结果是，通过CD光谱未观察到由于突变引起的结构变化。此外，将R410C静脉内给予大鼠。给药并检查其在血液中的半衰期，发现血浆来源的白蛋白(pHSA) 从上述结果来看，被设计为重组白蛋白的R410C是人源性变体，因此不存在抗原性问题。这些结果强烈表明它可以作为具有新功能的白蛋白制剂。的抗氧化能力。

项目成果

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专利数量（0）

Oxidation and carboxyl methyl lysine (CML)-modification of albumin ; possible involvement in the progression of oxidative stress in hemodialysis patients.

白蛋白的氧化和羧甲基赖氨酸 (CML) 修饰；

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Hypertension Res. 28
影响因子：
0
作者：
Ueo H;Motohashi H;Katsura T;Inui K.;Ueo H.et al.;Uwai Y.et al.;Daisuke Kadowaki;Kazuki Shimoishi;Makoto Anraku;Iwao Y.;Iwao Y.;Sato T.;Anraku M.
通讯作者：
Anraku M.

Chromium(III) ion and thyroxine cooperate to stabilize the transthyretin tetramer and suppress in vitro amyloid fibril formation.

铬(III)离子和甲状腺素协同稳定转甲状腺素蛋白四聚体并抑制体外淀粉样原纤维的形成。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
FEBS Lett. 580(2)
影响因子：
0
作者：
Sato T;Ando Y;Susuki S;Mikami F;Ikemizu S;Nakamura M;Suhr O;Anraku M;Kai T;Suico MA;Shuto T;Mizuguchi M;Yamagata Y;Kai H.
通讯作者：
Kai H.

Effect of olmesartan on oxidative stress in hemodialysis patients