Pax遺伝子群によって調節される神経発生機構の解析

Pax基因调控的神经发生机制分析

基本信息

批准号：
05780549
负责人：
川上厚志
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780549/
关键词：
Pax paired box homeo box 神経分化

项目摘要

神経系における細胞間の複雑な結合は、部域特異的な制御因子の発現と、それに続くシグナル分子やレセプター分子、細胞表面分子の発現調節によっていると考えられる。本研究では、神経系の分化と形成に重要な働きをする分子は、神経系の形成のごく初期に発現が誘導されてくるであろうとの予測に基づいて、制御遺伝子の標的遺伝子として、それらの分子の同定を試みようとしている。遺伝子の発現が細胞、組織の分化過程と相関していること、遺伝子群のいくつかのものについては突然変異体の表現型が特定の構造の欠失を伴うことなどから、ショウジョウバエのpaired遺伝子のホモローグとして同定されたPax遺伝子群に注目して研究を行っている。本年度の研究成果は以下の点である。(1)ニワトリの2から5日胚のcDNAから、RT-PCR法によってニワトリのPax遺伝子の同定を行った。Pax1.2.3.6.7.9のcDNA断片が同定できた。(2)PCRクローンをプローブとして、Pax遺伝子群の中で神経系形成の後期にまで発現しているものを同定した。9日胚の脳のcDNAライブラリーをスクリーニングした結果、Pax6と7のみが単離できた。cDNAの全長を単離し、塩基配列を決定した。Pax7の全長のcDNAは、本研究が初めて明らかにできた。(3)遺伝子の発現を個々の細胞レベルで明らかにし、また標的遺伝子の単離へとアプローチするためには、特異性の高い抗体が必須である。そこで、cDNAの部分を大腸菌で発現させて得られたペプチドを抗原として、Pax6および7に対する特異的なポリクローナル、モノクローナル抗体を作成した。現在、これらの抗体を用いて、Pax遺伝子の発現を詳細に解析している。

神经系统中细胞之间的复杂连接被认为取决于区域特异性调节因子的表达以及随后对信号分子、受体分子和细胞表面分子表达的调节。在本研究中，基于预测在神经系统形成的极早期阶段将诱导在神经系统的分化和形成中起重要作用的分子的表达，我们选择它们作为靶基因我们正在尝试识别调控基因的分子。由于基因表达与细胞和组织的分化过程相关，并且某些基因组的突变表型伴随着特定结构的缺失，因此了解果蝇中的配对基因是很重要的，我们正在进行的研究重点是Pax基因组，已被鉴定为同源物。今年的研究成果如下。 (1)利用RT-PCR从2至5日龄鸡胚胎的cDNA中鉴定鸡Pax基因。鉴定出Pax1.2.3.6.7.9的cDNA片段。 (2)使用PCR克隆作为探针，我们鉴定了表达直至神经系统形成后期的Pax基因。从9天大胚胎的大脑中筛选cDNA文库，结果仅分离到Pax6和7。分离全长cDNA并测定其核苷酸序列。该研究首次揭示了Pax7的全长cDNA。 (3) 高特异性抗体对于在个体细胞水平上阐明基因表达以及实现目标基因的分离至关重要。因此，使用通过在大肠杆菌中表达cDNA部分而获得的肽作为抗原来产生针对Pax6和7的特异性多克隆和单克隆抗体。我们目前正在使用这些抗体对 Pax 基因表达进行详细分析。