トラフグ連鎖地図の作成と優良形質遺伝子の探索

创建虎河豚连锁图谱并寻找优良性状基因

• 批准号: 05J12062
• 负责人: 古川 聡史
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J12062/
• 关键词: トラフグ; ゲノムデータベース; 育種; 高成長; 優良遺伝形質; インスリン様成長因子; 連鎖地図; QTL解析; ゲノムデーターベース; マイクロサテライト; ミオシン重鎖遺伝子

トラフグTakifugu rubripesは水産増養殖上重要な魚種の1つであるが、経験的に優良とされている系統は存在するものの、明確な品種や系統は確立されていない。また、安価な外国産養殖トラフグも増えており、国内の養殖業者の脅威となっている。本年度は最も重要な形質の1つである高成長に着目してその関連遺伝子の同定を目的に研究を行った。まず、既報のトラフグ連鎖地図を利用した量的形質遺伝子座解析により高成長関連遺伝子を同定することを試みた。飼育水温制御により、高成長系雄魚と天然の雌魚をかけ合わせて得たF_1世代の3歳魚の性成熟を誘導した。その結果、一部雄魚で排精が確認されたが、雌魚は全て死亡し、またF_1を作出するのに用いたP世代雌魚も既に死亡しているので、F_2または戻し交配世代の作出には至らず、解析を行えなかった。しかし、将来の交配に備えて、65万粒の卵を受精することができる量のF_1雄魚の凍結精子を作製した。続いて、候補遺伝子に目星をつけて、それを解析するという方針で研究を進めた。イヌにおいてIGF-のイントロン中の変異が体サイズに影響を及ぼすことが示されており、体サイズと高成長がリンクしているとすればトラフグでもIGFが関与しているという推測の下、インスリン様成長因子(IGF)に着目した。既報のヒトIGF-1およびトラフグIGF-2のタンパク質の配列をプローブに、フグゲノムデータベース(v4.0)に対して、BLAST検索を行い、相同性を示した領域にプライマーを設計した。トラフグの各組織より抽出したmRNAから1st strand cDNAを合成し、それを鋳型にRT-PCR、RACE法を行い、その増幅産物をクローニングし、各クローンの塩基配列の決定を試みた。その結果、トラフグIGF-1および2の全長に相当するそれぞれ182、215アミノ酸残基をコードするcDNAクローンを得た。

Takifugu Rubripes是渔业最重要的鱼类之一，但尽管在经验上被认为是极好的，但尚无清晰的品种或菌株。此外，廉价的外国种植的水槽的数量正在上升，这对国内水产养殖公司构成威胁。今年，我们专注于高增长，这是最重要的特征之一，并进行了研究，目的是确定相关基因。首先，我们尝试使用先前报道的金枪鱼粉红菌链接图来通过定量性状基因座分析来鉴定高生长相关的基因。通过控制饲养水的温度，通过结合高度成长的雄性和天然女性来诱导F_1生成的3岁鱼的性成熟。结果，一些雄性鱼类已经证实了排泄物，但是所有雌性鱼都死了，并且用来生产F_1的P生成雌性鱼已经死亡，因此未产生F_2或反向交叉产生，并且无法进行分析。但是，在准备将来交配的过程中，F_1雄性鱼的冷冻精子的生产数量可施肥65万卵。接下来，我们进行了研究，以确立候选基因并进行分析的政策。 IGF-内含子中的突变已显示会影响狗的身体大小，并且我们专注于胰岛素样生长因子（IGF），这是在猜测的情况下，如果将身体大小和高生长联系起来，IGF也会参与金枪鱼pufferfish。使用先前报道的人类IGF-1和金枪鱼pufferfish IGF-2作为探针的蛋白质序列，对Pufferfish基因组数据库（v4.0）进行了爆炸搜索，并在显示同源性的区域中设计了引物。从从金枪鱼粉的每个组织中提取的mRNA合成第一个链cDNA，并使用该模板使用了RT-PCR和种族，并将放大产物克隆，并尝试了每个克隆的碱基序列。结果，分别编码182和215氨基酸残基的cDNA克隆对应于金枪鱼pufferfish IGF-1和2的全长。

项目成果

Genetic comparison between torafugu Takifugu rubripes and its closely related species karasu T.chinensis

红鳍东方鲀与其近缘种乌东方鲀遗传比较

• 发表时间: 2008
• 期刊: Fisheries Science (印刷中)
• 作者: Md.Shaheed Reza;Satoshi Furukawa;Toshitaka Mochizuki;Hisashi Matsumura and Shugo Watabe
• 通讯作者: Hisashi Matsumura and Shugo Watabe

トラフグインスリン様成長因子-1および2遺伝子のcDNAクローニング(口頭発表)

虎鲀胰岛素样生长因子 1 和 2 基因的 cDNA 克隆（口头报告）

• 发表时间: 2008
• 作者: 古川 聡史;武島 弘彦;西田 睦;渡部 終五
• 通讯作者: 渡部 終五