ヘテロサイクリックアミン誘発実験動物腫瘍における遺伝子変化

杂环胺诱导的实验动物肿瘤的遗传变化

基本信息

批准号：
05152150
负责人：
長尾美奈子
金额：
$ 1.15万
依托单位：
National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152150/
关键词：
PhIP APC ヘテロサイクリックアミン genomic instability

项目摘要

PhIP誘発ラット大腸がんにおけるAPC遺伝子変異の関与を明らかにすることを目的とし、先ずラット正常APC cDNAの塩基配列を明らかにした。F344雄ラット肝よりRNAを抽出し、ヒトAPCのヌクレオチド配列をプライマー配列に用いて、RT-PCRで増巾し、direct sequentingでcDNAの全塩基配列を決定した。ヒトと高い相同性を示し、1ケ所に6塩基対の挿入が、他の場所に3塩基対の欠失があった。コーディング領域は、ヒトより3塩基対短かい8526ヌクレオチドで、ヌクレオチドレベルで86.2%、アミノ酸レベルで90.2%の相同性があった。次に得られたラットのヌクレオチド配列に基づいてプライマーを作成し、PCR-SSCP解析によりPhIP誘発ラット大腸がんにおける変異の有無を検討した。2例の腺がんで、コドン1413のGGG部位から1個のG塩基の欠失が検出された。さらにこれら変異のあった腺がんのうち1個にコドン869で同様にGGGから1個のG塩基の欠失が検出された。検出された突然変異がすべてGGGからGGへの変異であったことから、この変異をPhIPのmutational fingerprintとして用いることで出来る可能性がある。次にPhIP誘発大腸がんにおけるgenomic instabilityの関与を、microsatellite probeを用いて検索した。15の異なる染色体に分布する43種類のmicrosatelliteに対するプライマーを用いて、腫瘍DNAをPCRで増巾し変性条件下で泳動した。8例中2例の腫瘍で1繰り返し単位の延長が、少なくとも2つのloci以上で検出された。この事はPhIP大腸発がんにgenomic instabilityが関与していることを示唆するものである。

为了阐明 APC 基因突变与 PhIP 诱导的大鼠结直肠癌的关系，我们首先确定了正常大鼠 APC cDNA 的核苷酸序列。从F344雄性大鼠肝脏中提取RNA，以人APC的核苷酸序列为引物序列，通过RT-PCR扩增，并通过直接测序确定cDNA的完整碱基序列。它与人类表现出高度同源性，在一个位置插入了 6 个碱基对，在另一个位置删除了 3 个碱基对。该编码区为8526个核苷酸，比人类短3个碱基对，核苷酸水平同源性为86.2%，氨基酸水平同源性为90.2%。接下来，根据获得的大鼠核苷酸序列制作引物，并通过PCR-SSCP分析检查PhIP诱发的大鼠结直肠癌中是否存在突变。在两例腺癌中检测到密码子 1413 处 GGG 位点的 1 个 G 碱基缺失。此外，在其中一种具有突变的腺癌中，在密码子 869 处检测到 GGG 中的一个 G 碱基缺失。由于检测到的所有突变都是从 GGG 到 GG，因此该突变可能可以用作 PhIP 的突变指纹。接下来，我们使用微卫星探针研究了 PhIP 诱导的结直肠癌中基因组不稳定性的参与。使用分布在 15 条不同染色体上的 43 种微卫星的引物通过 PCR 扩增肿瘤 DNA，并在变性条件下运行。在 8 个肿瘤中有 2 个的至少两个基因座中检测到单个重复单元延伸。这表明基因组不稳定性与 PhIP 结直肠癌发生有关。