消化器癌の発生に関わるヘッジホッグ経路のエピジェネティクな制御機構の解析

Hedgehog通路参与胃肠道肿瘤发生发展的表观遗传调控机制分析

• 批准号: 05J05135
• 负责人: 渡邉 すぎ子
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J05135/
• 关键词: 消化器癌; Sonic Hedgehog; 遺伝子; 発現制御; クロマチン; 発生分化

1)消化器癌細胞株におけるSonic Hedgehog ; ShhおよびShhシグナル経路の発現検討RT-PCRによりShhおよびShhシグナル分子のmRNAを、またShhに対する特異的抗体を用いたWestern blot法および免疫染色法によりタンパク質の発現を解析したところ、多くの細胞株でShhやそのシグナル経路の発現を認めた。2)Shh過剰発現による細胞制御機構の解析ShhをPCR法にてクローニングし、Shh発現ベクターを作成した。各種消化器癌細胞株にShh発現ベクターを遺伝子導入し、細胞形態や細胞増殖能の変化を観察したところ、明らかな変化は認められなかった。3)Shhのプロモーター領域の解析Shhのプロモーター領域の配列をゲノムよりPCR法にてクローニングした。消化器癌にて高発現がみられるクロマチン結合因子のShhプロモーターへの結合性を、in vitroにおいてバンドシフト法で、in vivoにおいてクロマチン免疫沈降で検出した。またShhのプロモーター領域を含むルシフェラーゼベクターを作成し、ルシフェラーゼアッセイによりそのプロモーター活性を検出した。4)クロマチン結合因子とShh発現量の関連性消化器癌細胞株においてクロマチン結合因子をsiRNA導入によりノックダウンし、特異的抗体を用いたWestern blot法によりそのノックダウン効果を定量した。さらにクロマチン結合因子ノックダウンによるShh発現量の変化をreal time RT-PCRや特異的抗体を用いたWestern blot法により定量したところ一部に変化がみられた。

1)Sonic Hedgehog在胃肠道癌细胞系中的表达；采用RT-PCR检测Shh和Shh信号分子的mRNA表达，并采用Western blot法和免疫染色法检测Shh和Shh信号分子的表达。当我们分析Shh的表达时，我们观察到Shh在许多细胞系中的表达及其信号通路。 2)Shh过表达的细胞调控机制分析通过PCR方法克隆Shh以创建Shh表达载体。当将Shh表达载体导入各种胃肠道癌细胞系中观察细胞形态和细胞增殖能力的变化时，没有观察到明显的变化。 3)Shh启动子区的分析通过PCR从基因组中克隆Shh启动子区的序列。通过体外带位移法和体内染色质免疫沉淀法检测在胃肠道癌症中高表达的染色质结合因子与Shh启动子的结合。此外，构建了含有Shh启动子区的荧光素酶载体，并通过荧光素酶实验检测其启动子活性。 4)染色质结合因子与Shh表达水平之间的关系通过引入siRNA，在胃肠道癌细胞系中敲低染色质结合因子，并通过使用特异性抗体的Western印迹来量化敲低效果。此外，通过使用特异性抗体的实时RT-PCR和蛋白质印迹法对由于染色质结合因子敲低引起的Shh表达水平的变化进行了定量，并观察到了一些变化。

项目成果

構造的クロマチン因子-遺伝子発現とゲノム安定性の調節-

结构染色质因子 - 基因表达和基因组稳定性的调节 -

• 期刊: 実験医学 (印刷中)
• 作者: 高野大樹;ファンダンホア;大谷順;高野 大樹;高野 大樹;杉島 正一;萩原 義徳;杉島 正一;萩原 義徳;杉島 正一;坂本 寛;井上 浩義;Kazuya Tanaka;Kazuya Tanaka;田中 万也;Kazuya Tanaka;Kazuya Tanaka;田中 万也;田中 万也;Ichimura T;渡邉 すぎ子
• 通讯作者: 渡邉 すぎ子