エピジェネティクス研究からの絨毛細胞の分化メカニズムの解明

通过表观遗传学研究阐明滋养层细胞的分化机制

基本信息

批准号：
16790952
负责人：
峯川亮子
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790952/
关键词：
絨毛細胞分化 RAI NF-κB Sp1 GLUT1 Rcho-1

项目摘要

NF-κBの主要サブユニットであるp65に対する阻害因子として新たに同定されたRelA-associated inhibitor(RAI)の、絨毛細胞の分化過程における発現の変動について、引き続き検討を行った。ラット絨毛癌細胞株Rcho-1細胞の分化に伴うRAI蛋白量の変動をウェスタンブロット法にて検討したところ、Rcho-1細胞の分化に伴いRAI蛋白量の増加を認めた。さらに、Rcho-1細胞にRAIのexpression vectorを強制発現させた場合、核蛋白におけるSp1蛋白発現量には変動が見られなかったが、免疫沈降法を用いた検討によりSp1と結合するRAIの増加が認められた。しかしながらmobility shift解析を用いた検討では、Sp1のGLUT1プロモーターへの結合に対するin vivoでのRAIの抑制効果は明らかではなかった。また、Rcho-1細胞にRAIのexpression vectorを強制発現させた場合では、コントロール(empty vector)と比較して巨細胞の有意な増加が認められた。以上より、RAIは絨毛細胞に存在し、Sp1を介して胎盤絨毛の機能的分化に寄与するのみならず、形態的分化の促進にも関与する可能性を示唆する結果を得た。次にNF-κB結合部位を有することが確認されているヒトIL-8プロモーター遺伝子を、RAIのexpression vectorと同時にヒト絨毛癌細胞株であるBeWo細胞へ遺伝子導入し、IL-1β添加によるプロモーター活性の変動をルシフェラーゼアッセイ法にて検討した結果、RAIの導入によるプロモーター活性低下が認められた。これにより、RAIが絨毛細胞においても他と同様にNF-κBの阻害因子として機能することが確認され、RAIが絨毛細胞における炎症制御にも関与する可能性が示唆された。

我们继续研究在分化绒毛细胞的过程中，新近识别为p65（NF-κB的主要亚基）的抑制剂（RAI）的表达变化。当RAI蛋白量的波动伴随着大鼠脉络膜脊髓瘤细胞系RCHO-1细胞的分化，通过蛋白质印迹研究了RAI蛋白的增加，而RCHO-1细胞的分化观察到了RAI蛋白的增加。此外，当RAI的表达载体被迫在RCHO-1细胞中表达时，在核蛋白中SP1蛋白的表达水平中未观察到变化，但是通过使用免疫沉淀检查RAI与SP1结合的增加。但是，使用迁移率分析的研究并未揭示RAI在体内对SP1与GLUT1启动子结合的抑制作用。此外，当RCHO-1细胞强行表达RAI的表达载体时，与空载体相比，观察到巨细胞的显着增加。从以上，我们发现结果表明RAI存在于绒毛细胞中，不仅有助于通过SP1通过SP1进行胎盘绒毛的功能分化，而且还可能参与促进形态学分化。接下来，已确认具有NF-κB结合位点的人IL-8启动子基因被转移到Bewo细胞，人类绒毛膜脊髓瘤细胞系，与RAI的表达载体同时使用RAI的表达载体，并使用Luciferase Assay Activer和Provationer Active对IL-1β引起的启动子活性的变化进行了促进。这证实了RAI充当绒毛细胞中NF-κB的抑制剂以及其他因素，这表明RAI也可能参与绒毛细胞炎症的控制。