ニューロステロイドの鎮痛機序解明を目指した中枢-脊髄-末梢神経での総合的解析

中枢、脊髓、周围神经综合分析，阐明神经类固醇的镇痛机制

基本信息

批准号：
16790905
负责人：
堀下貴文
金额：
$ 2.18万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らは生体内に存在するニューロステロイド(以降NS)の抗侵害作用の全貌を明らかにするため、中枢神経、脊髄、末梢神経におけるNSの作用解析を計画した。(1)中枢神経系における作用解析:海馬スライスを用いたPatch-Clamp法によるGABA_A誘発性電流やGlycine誘発性電流に対するNSの作用の解析、(2)脊髄における作用解析:(2)-1ラット脊髄後角スライスを用いたPatch-Clamp法によるGABA_A誘発性電流に対するNSの作用の解析、(2)-2ラット培養脊髄後根神経節(DRG)細胞を用いたサブスタンスP(Sub P)、ニコチンなどの刺激による細胞内カルシウムの変動に対するNSの影響の解析、(2)-3ラット培養DRG細胞を用いたPatch-Clamp法によるニコチン誘発性電流、GABA誘発性電流等に対するNSの作用の解析、(3)再構築系による作用解析:アフリカツメガエル卵母細胞発現系を用いたムスカリン、Sub P、CGRP受容体のリガンド誘発性電流に対するNSの作用の解析、電位依存性ナトリウムチャネル(Naチャネル)に対するNSの作用の解析、である。平成17年は、アフリカツメガエル卵母細胞発現系を用いて、NaチャネルのサブタイプであるNa_v1.2(中枢神経系に発現)、Na_v1.4(骨格筋に発現)に対するアロプレグナノロン(AP)、プレグネノロン(PREG)、デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)の作用を検討した。その結果、APはNa_v1.2、Na_v1.4機能をともに抑制したが、PREG、DHEAはNa_v1.2、Na_v1.4ともに影響を与えなかった。APはニューロステロイドの中で最も抗侵害作用が強いとされ、PREG、DHEAは抗侵害作用が弱いことが知られている。これにより、APによるNaチャネルの抑制がその抗侵害作用機序の一つである可能性が示唆された。

申请人计划分析NS在中枢神经系统，脊髓和周围神经中的作用，以阐明人体中存在神经类固醇（以下称为NS）的全部抗伤害感受作用。（1）中枢神经系统中的作用分析：使用海马切片对NS对GABA_A诱导的电流和甘氨酸诱导的电流的影响分析；（2）脊髓中的作用分析：（2）使用大鼠脊髓的背角切片对NS对GABA_A诱导的电流的影响；（2）物质P（在培养的大鼠中使用背根神经节（DRG）细胞的亚基分析Ns对Ns的影响，由于P），尼古丁刺激，烟碱等，（2）NS对NICOTINE诱导的犯罪诱导的电流的影响，分析Ns对NS对NS对NS对NINS对细胞的影响（2）分析的分析的分析，该分析使用贴平的影响（3）。使用异爪蟾卵母细胞表达系统的肌液，亚P和CGRP受体的配体诱导的电流，以及NS对电压依赖性钠通道（NA通道）的影响的分析。在2005年，我们研究了异源性（AP），妊娠（PreG）和脱氢表甲酮（DHEA）对Na通道子类型Na_v1.2（使用Xenopus ocypey ocyte Servelys Systements in Na channel Subtypes Na_v1.2（在中枢神经系统中表达）和Na_v1.4（用骨骼肌表达）。结果，AP抑制了Na_v1.2和Na_v1.4功能，但是PreG和DHEA对Na_v1.2或Na_v1.4没有影响。据说AP具有神经类固醇的最强抗伤害感受作用，而PREG和DHEA的抗伤害感受作用较弱。这表明通过AP抑制Na通道可能是其抗内碱机制之一。