細胞内膜輸送システムに関与する新しい分子の細胞生物学的研究

细胞内膜转运系统新分子的细胞生物学研究

基本信息

批准号：
16770144
负责人：
中村信大
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度の研究では,膜二回貫通型RINGフィンガータンパク質MARCH-II (membrane-associated RING-CH finger protein)を同定し,これが膜輸送・膜融合の調節因子であるSNAREタンパク質syntaxin6と直接結合することを明らかにした。平成17年度の研究では,さらにMARCH-IIに相同性の高い分子としてMARCH-IIIを同定し,その機能解析から以下に述べるようにMARCH-IIIがMARCH-IIに非常に良く似た性質をもつことを明らかにした。(1)ラットMARCH-IIIがユビキタスな組織発現分布を示すことを明らかにした。(2)培養細胞COS7細胞にMARCH-IIIを発現させたところエンドゾームに一部局在することを認めた。(3)免疫沈降法によりMARCH-IIIがsyntaxin6と複合体を形成することを明らかにした。(4)MARCH-IIIの過剰発現により,トランスフェリンの取り込み阻害が生じ,細胞表面とトランスゴルジ網(TGN)を循環することが知られているTGN46がMARCH-IIIの存在する膜構造に集まることを認めた。(5)このような阻害効果は,MARCH-IIIのRING fingerドメインやPDZ結合モチーフを欠失した変異体を発現させた際には観察されなかった。(6),MARCH-IIおよびMARCH-IIIのRING fingerドメインはE3ユビキチンリガーゼ活性を有することを明らかにした。以上の結果からMARCH-IIIがエンドゾームにおける膜輸送に関与することを示唆することができた。

上一年的研究确定了膜 - 两种胶合式的环形手指蛋白三月II（与膜相关的环形手指蛋白），该蛋白直接与膜转运和膜融合的调节剂SNARE蛋白Syntaxin6结合。在2005年的一项研究中，三月III进一步被鉴定为与3月II同源性高同源性的分子，其功能分析表明，如下所述，三月III与3月-II具有非常相似的特性。（1）发现大鼠三月III表现出无处不在的组织表达分布。（2）当三月III在培养细胞中的COS7细胞中表达时，发现它位于内体。（3）免疫沉淀表明3月III形成了语法的复合物。（4）3月III的过表达会导致转铁蛋白摄取的抑制作用，而TGN46（已知可以通过细胞表面循环和反式高尔基网络（TGN）循环，发现在存在三月III的膜结构中聚集。（5）当表达了删除三月III或PDZ结合基序的环指域的突变体时，未观察到这种抑制作用。（6），据揭示了三月II和March-III的环指域具有E3泛素连接酶活性。上述结果表明，三月III参与内体的膜运输。