植物の発生、抵抗性反応におけるNMDの機能に関する解析

NMD在植物发育及抗性反应中的作用分析

• 批准号: 04J10986
• 负责人: 堀 孝一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J10986/
• 关键词: Nonsense mediated mRNA decay; 選択的スプライシング; RNA代謝

前年までに行ったNonsense mediated mRNA decay (MD)によって分解されている遺伝子(NMD標的遺伝子)の予測とAtUPF3遺伝子のNMDへの関与の結果をまとめ、Plant Journalへの報告を行った。その結果をふまえNMDに関与することが期待されるAtUPF1,AtUPF2とAtUPF3遺伝子の相互作用の解析を、免疫沈降実験によって行った。その結果大腸菌で発現した部分長AtUPF1とAtUPF2はそれぞれ、植物体で発現したAtUPF3と相互作用していることが確認でき、AtUPF1,AtUPF2,AtUPF3は複合体を形成していることが示唆された。次に、AtUPF3と緑色蛍光タンパク質の融合タンパク質の細胞内局在を解析した結果、AtUPF3は核小体および細胞質全般と細胞質に顆粒状の構造として局在していることを明らかにした。さらに3種類のAtUPF3の部分欠失体を作成し、同様に細胞内局在の解析を行った結果、AtUPF3のC末端側2/3が核小体への局在に強く関連していることを示した。またAtUPF3として機能しないことが予測される部分欠失体では全て細胞質の顆粒状の局在が観察されなかったことから、この細胞質における顆粒状構造はNMDにおいて重要な働きをしていることが示唆された。この顆粒状構造はサイクロヘキシミドによってタンパク質翻訳を停止しNMDを阻害すると、すみやかに消失することを発見した。よってこの顆粒状構造はNMDにおけるRNA分解の場であることが期待される。

我们总结了废话介导的mRNA衰变（MD）（NMD靶基因）降解的基因的预测，以及NMD中ATUPF3基因参与的结果，直到上一年，并在工厂杂志上进行了报道。根据结果​​，通过免疫沉淀实验进行了预期参与NMD的ATUPF1，ATUPF2和ATUPF3基因之间的相互作用。结果，已经证实，在大肠杆菌中表达的部分长度ATUPF1和ATUPF2与植物中表达的ATUPF3相互作用，这表明ATUPF1，ATUPF2和ATUPF3形成了复合物。接下来，我们分析了ATUPF3和绿色荧光蛋白的融合蛋白的亚细胞定位，并揭示了ATUPF3位于核仁中的颗粒结构，通常是细胞质和细胞质。还产生了其他三种类型的ATUPF3部分缺失，对亚细胞定位的类似分析表明，ATUPF3 C末端的2/3与核仁的定位密切相关。此外，在所有部分缺失中未观察到不像ATUPF3作用的所有部分缺失，这表明该细胞质颗粒结构在NMD中起重要作用。我们发现，这种颗粒状结构在阻止蛋白质翻译和抑制NMD的环己酰胺下很快消失。因此，预计这种颗粒结构是NMD中RNA降解的位点。