慢性電気刺激による網膜神経節細胞の長期生存・軸索再生

慢性电刺激视网膜神经节细胞的长期存活和轴突再生

基本信息

批准号：
15790985
负责人：
三好智満
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

軸索切断後の網膜神経節細胞(RGC)の生存と軸索再生が電気刺激によって促進できるかどうかを明らかにすることが本研究の目的である。1)昨年度に引き続き、視神経切断直後の一過性の電気刺激によって、ネコRGCの1週間後の生存が促進可能かどうかについて調べた。RGCを予め逆行性標識しておき、切断直後にカフ型双極電極を装着し、持続時間300μsecのパルス刺激を20Hzで2時間加えた。一発のパルスの電流量は0(sham),0.5,1,3,5mAと変化させた。1週間後に網膜伸展標本上で生存細胞数を計数し、生存率を調べた。その結果、網膜全体にわたったRGCの生存率は、切断群の40.6%に対して3mAで75.5%と増加することがわかった。しかし、1mAでは網膜中心部だけには効果があるものの、網膜全体のRGCの生存率は、50.2%と有意な増加は見られなかった。2)ネコ視神経を切断後、末梢神経を自家移植し、眼球側の視神経断端にカフ電極を設置した。カフ電極からの導線を、頭蓋骨上の小さな刺激装置に繋いだ。動物の行動をできるだけ抑制せずに意識下で慢性的に刺激するために、刺激コマンドを無線で頭蓋骨上の刺激装置に送り刺激した。毎日1時間の刺激を6週間行った後に、移植片の縫合部から2cm離れた部位に逆行性色素を注入したが、網膜上で標識された網膜神経節細胞は観察されなかった。これは、当初準備していた無線刺激装置の出力が最大約0.8mAと不足していたことに加え、連日の単相矩形波パルス刺激が、移植片そのものに障害を与えた可能性が考えられた。もし栄養因子の発現や感受性の増強が起こっているならば数日間は持続すると考えられることなどから、今後、3日おきなどの少し軽い電気刺激で再度検討する必要があると考えられた。

这项研究的目的是确定轴突切开术后视网膜神经节细胞（RGC）的存活以及轴突再生是否可以通过电刺激促进。 1）从去年开始，我们研究了视神经切割后的短暂性电刺激是否可以在一周后促进CAT RGC的存活。先前对RGC进行了逆行标记，切割后立即连接袖口双极电极，并在20Hz时施加持续时间为300μsec的脉冲刺激2小时。每个脉冲的当前量与0（假），0.5、1、3和5 mA不同。一周后，对视网膜延伸标本和存活率进行了可行细胞的数量。结果表明，整个视网膜的RGC的存活率在3MA时增加到75.5％，而裂解组为40.6％。但是，尽管1MA仅在中央视网膜区域有效，但视网膜的RGC的存活率并未显着增加到50.2％。 2）切断猫的视神经后，将周围神经自体移动，并将袖口电极放在眼球侧的视神经阴茎上。袖口电极的导体连接到头骨上的一个小刺激器。刺激命令无线地发送到头骨上的刺激装置，以长期刺激动物的行为，而无需尽可能多地抑制它。每周刺激1小时后，在距移植物缝合线2厘米的位点注射逆行染料，但在视网膜上未观察到视网膜神经节细胞。人们认为这是由于最初制备的无线刺激装置缺乏输出所致，该设备的最高约为0.8mA，并且每日单相方波脉冲刺激造成了移植物本身造成伤害。人们认为，如果表达营养因素或提高灵敏度将持续几天，因此人们认为需要通过轻微的电刺激（例如将来每三天）重新检查它。