網膜神経節細胞のタイプ特異的生存と細胞内シグナル伝達機構

视网膜神经节细胞的类型特异性存活和细胞内信号转导机制

• 批准号: 13771023
• 负责人: 三好 智満
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771023/
• 关键词: 網膜; 神経節細胞; 神経変性; アポトーシス; 細胞死; カスパーゼ; TUNEL法; 視神経; 網膜神経節細胞; 神経細胞死; ピクノーシス細胞; 軸策切断; カスパーゼ阻害剤; 網膜; 神経節細胞; 神経変性; アポトーシス; 細胞死; カスパーゼ; TUNEL法; 視神経; 網膜神経節細胞; 神経細胞死; ピクノーシス細胞; 軸策切断; カスパーゼ阻害剤

本研究の目的は、軸索切断による細胞死メカニズム、そして生存・死に関わる細胞内シグナル機構が、ネコ網膜神経節細胞のタイプ間でどのように異なるか、を明らかにすることである。本年度は以下の研究を行った。1.視神経切断後に網膜中心部にアポトーシスが起こっていることを確認するために、網膜の垂直断面標本を作成し、TUNEL法を行った。網膜中心部から離れた場所では1切片上にTUNEL陽性細胞はほとんど見られなかったが、網膜中心部を含む切片では、同じ範囲に最大で19個のTUNEL陽性細胞が出現した。これにより、昨年度網膜中心部に観察されたピクノーシス細胞にはDNAの断片化を伴うアポトーシスが生じていることが確認された。2.昨年に引き続き、視神経切断後にカスパーゼ阻害剤z-DEVD-cmkを硝子体内投与し、β細胞の生存が促進されるかを調べた。視神経切断7日後に生存している網膜神経節細胞に色素の注入を行い、樹状突起形態から細胞タイプを同定して、α細胞とβ細胞の生存率を調べた。その結果、α細胞の1週間後の生存率は、コントロール群で76.5±37.6%であ。り、カスパーゼ阻害剤投与群では85.0±55.3%と有意差は見られなかった。しかし、α細胞の存在比率がそもそも小さいため相対的なサンプリングの少なさから、標準偏差が大きくなっている。逆行性標識された神経節細胞の中でα細胞は細胞体の特徴から区別可能なため、網膜全体にわたって1mmおきの格子点上で計数して生存率を調べると、対照群81.5±11.4%(n=5)に対して投与群で83.5±9.9%(n=4)であり、α細胞に対して生存促進効果はなかった。β細胞は対照群の37.7±5.4%に対し、投与群では70.7±17.0%とアポトーシスを阻止することによって著明に生存率が向上した。以上のことから、β細胞の急激な細胞死はアポトーシスによるものであるが、α細胞の緩徐な細胞死は他の原因による細胞死であることが明らかになった。

这项研究的目的是阐明轴切开术引起的细胞死亡机制以及猫视网膜神经节细胞类型之间涉及生存和死亡的细胞内信号传导机制如何不同。今年，我们进行了以下研究：1。确认切断视神经后的中央视网膜中凋亡，制备了视网膜的垂直横截面标本，并进行了TUNEL方法。在距中央视网膜中央的一个部分上发现的TUNEL阳性细胞很少，但是在包含中央视网膜的部分中，最多有19个TUNEL阳性细胞出现在相同的范围内。这证实了去年在中央视网膜区域观察到的野餐细胞中发生了凋亡。 2。去年，在切断视神经后，对caspase抑制剂Z-DEVD-CMK进行了玻璃体内施用，以确定是否可以促进β细胞存活率。视神经切割后7天注射活泼的视网膜神经节细胞，并从树突形态中鉴定出细胞类型，并检查了α细胞和β细胞的存活率。结果，一周后α细胞的存活率在对照组中为76.5±37.6％。此外，在用caspase抑制剂治疗的组中，没有发现显着差异，为85.0±55.3％。但是，由于首先，由于α细胞的丰度比很小，因此由于采样相对较小，标准偏差增加。在逆行标记的神经节细胞中，可以将α细胞与细胞的体细胞特征区分开来，以及通过在整个视网膜中每1 mm计数晶格点检查生存率时，对照组的81.5±11.4％（n = 5），在治疗组中，没有83.5±9.9％（n = 4）在治疗组中，没有效果。通过阻断凋亡，生存率显着提高，而对照组为37.7±5.4％，而治疗组为70.7±17.0％。从上面可以看出，β细胞的突然细胞死亡是由凋亡引起的，而α细胞的慢细胞死亡是由其他原因引起的。